丙酸氟替卡松乳膏微生物限度检查方法验证.docVIP

丙酸氟替卡松乳膏的微生物限度检查方法验证 　　[摘 要]微生物限度是为确保药品质量及药品安全而为药品生产企业以及药品检测部门提出的一种标准化的规范制度。微生物计数法通常采用平皿法（常规法）、薄膜过滤法、MPN法。其中平皿法因其操作简便、快速的特点，在此参考了《中国药典》2015年版的常规法，对丙酸氟替卡松乳膏的微生物限度进行了检验方法的试验。在试验中将代表试验菌：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉加入本品中，对各试验菌的回收率进行逐一验证，从而建立了丙酸氟替卡松乳膏的微生物限度的检查方法。 　　中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2018）06-0313-01 　　1、仪器 　　卧式压力蒸汽灭菌器WS-200YDB江阴滨江医疗设备有限公司、立式灭菌器LMQ.C型山东新华医疗器械股份有限公司、YG组装式空调器靖江兴国空调制冷有限公司、生物安全柜BSC-1600IIAz苏州安泰空气技术有限公司、生化培养箱LRP-250广东省医疗器械厂。 　　2、验证过程 　　验证方法：照2015版四部非无菌产品微生物限度检查。 　　2.1 微生物计数法：计数方法适用性试验。 　　2.2 控制菌检查法：控制菌检查方法适用性试验。 　　2.2.1 1、菌液制备 　　检查用菌种：铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]，金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]，枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]，白色念珠菌[CMCC（F）98001]，黑曲霉[CMCC（F）98003] 　　菌株不得超过5代 　　来源：浙江省食品药品检验所 　　将上述菌种的新鲜培养物分别接种至规定培养基培养，细菌、酵母菌取此培养液1mL至0.9%无菌氯化钠溶液9mL中，采用10倍递增稀释法，稀释至使菌液浓度小于100cfu/mL；黑曲霉用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1mL含孢子量不大于100cfu的孢子悬液，备用。 　　2.2.2、供试液的制备： 　　取本品10g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100mL，37℃保温振摇至供试品分散均匀，即为1：10供试液。 　　2.2.3、计数方法适用性试验 　　3.1试验组制备： 　　3.1.1需氧菌总数测定取1：10供试液9.9mL，5份，每份分别加入金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、白色念珠菌的菌悬液0.1mL后摇匀，然后分别吸取上述混合液1mL注入无菌平皿中，并立即倾注15-20m温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每种试验菌平行制备2个皿，以均值作为计数结果。。 　　3.1.2霉菌和酵母菌总数测定取1：10供试液9.9mL，2份，每份分别加入黑曲霉、白色念珠菌的菌悬液0.1mL后摇匀，然后分别吸取上述混合液1mL注入无菌平皿中，并立即倾注15-20mL温度不超过45℃的沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每种试验菌平行制备2个皿，以均值作为计数结果。 　　3.2供试品对照组的制备：取1：10供试液，以PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液代替菌液，同试验组操作，加入相应培养基。 　　3.3菌液对照组制备：取PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液代替供试液，按试验组操作加入试验菌液，加入相应培养基。 　　3.4培养将上述各组含胰酪大豆胨琼脂培养基平板倒置，置30～35℃培养，其中含金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的试验菌的平皿培养3天，含黑曲霉、白色念珠菌的试验菌的平皿培养5天；将上述各组含沙氏葡萄糖琼脂培养基平板倒置，置20～25℃培养5天。 　　3.5观察和计数对每个平皿逐目检查计数，结果以培养终的计数为准。平行3批样品。 　　4、验证结果 　　4.1 需氧菌总数测定结果：供试品对照组菌落计数分别为0、0、0. 　　金黄色葡萄球菌，3个批号试验组的菌落计数分别为53、54、51，菌液对照组菌落计数为83，相应比值为0.64、0.65、0.61。 　　铜绿假单胞菌，3个批号试验组的菌落计数分别为18、18、16，菌液对照组菌落计数为19，相应比值为0.95、0.95、0.84。 　　枯草芽孢杆菌，3个批号试验组的菌落计数分别为28、30、30，菌液对照组菌落计数为34，相应比值为0.82、0.88、0.88。 　　白色念珠菌，3个批号试验组的菌落计数分别为49、45、47，菌液对照组菌落计数为49，相应比值??1.0、0.92、0.96。 　　黑曲霉，3个批号试验组的菌落计数分别为48、54、54，菌液对照组菌落计数为51，相应比值为0.94、1.1、1.1。 　　白色念珠菌，3个批号试验组的菌落计数分别为