丝裂霉素―C抑制大鼠代膀胱分泌黏液的实验研究.docVIP

丝裂霉素―C抑制大鼠代膀胱分泌黏液的实验研究 　　【摘要】 目的：利用大鼠代膀胱模型，观察丝裂霉素-C和无水乙醇对肠黏膜和杯状细胞的作用。方法：实验用SD大鼠20只按照随机数字表法分为生理盐水对照（NS）组、丝裂霉素（MMC）组（0.6 mg/ml）。建立大鼠代膀胱模型，分别于模型建立后的第8、11、14天灌注丝裂霉素-C，留取尿液标本，第17天处死大鼠，取代膀胱组织，行HE染色、AB-PAS染色以及MUC-2免疫组化染色，测定尿液中的总黏液蛋白以及唾液酸的浓度，对肠黏膜进行黏膜评分。结果：MMC组黏蛋白浓度（4.16±0.97）mg/ml较NS组（11.63±2.31）mg/ml显著降低（P0.05）；MMC组唾液酸浓度（199.7±26.6）mg/L较NS组（411.4±45.1） mg/L显著降低（P0.05）；AB-PAS：MMC组的蓝染杯状细胞比例（15.73±4.1）0%与NS组（42.96±9.51）%相比差异有统计学意义（P0.05）。Muc-2免疫组化：MMC组杯状细胞数（39.12±5.98）与NS组（35.22±7.20）相比无显著性差异，回肠黏膜评分：MMC组（平均秩24.88）与NS组（平均秩10）相比差异有统计学意义（P0.05）。结论：丝裂霉素-C可使尿液中黏蛋白浓度以及唾液酸浓度显著下降，同时丝裂霉素可使成熟杯状细胞比例下降。 　　【关键词】 丝裂霉素-C； 代膀胱； Muc-2； 杯状细胞 　　中图分类号 R737.14 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2015）33-0155-03 　　doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2015.33.075 　　尿流改道手术是泌尿外科治疗浸润性膀胱肿瘤的一种有效治疗方式[1]。膀胱全切后的尿路重建术式主要有三类：不可控尿流改道、可控式尿流改道、膀胱重建。然而不管采用何种术式，术后肠道与泌尿道均保留了其自身的神经和血管，因此肠黏液的分泌功能依然存在[2]。鉴于尿流改道术后远期随着时间推移，肠绒毛和微绒毛会逐渐萎缩，黏液分泌量也随之会减少，故如何能以持久、有效的方法来抑制或减少术后早期肠黏液的分泌和排放是一直以来国内外学者致力研究的课题[3]。本实验利用大鼠代膀胱模型，观察丝裂霉素对肠黏膜上皮分泌以及形态结构的影响情况。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物与分组 　　由大连医科大学实验动物中心提供的健康SD大鼠20只，体重250～270 g，许可证号SCXK（辽）2008-0002。按照随机数字表法分为2组：生理盐水对照组（NS组，n=10）、丝裂霉素组（MMC组，0.6 mg/ml，n=10）。 　　1.2 主要试剂 　　大鼠MUC-2多克隆抗体（兔抗鼠）；BCA蛋白浓度测定试剂盒；唾液酸浓度测定试剂盒；丝裂霉素-C（10 mg/支）。 　　1.3 大鼠代膀胱模型 　　取下腹正中切口，距盲肠2～3 cm近端游离一段血供较好的末端回肠（带血管蒂），截取后以直径相当于6-0可吸收线的慕丝线对回肠进行端端吻合，恢复其连续性。距膀胱三角区0.3 cm处切除大部分膀胱，将新膀胱以“U形吻合法”吻合于膀胱残端。逐层关闭腹腔，术后至膀胱灌药结束前大鼠若有死亡，立即重新造模补齐。 　　1.4 膀胱灌药方式 　　模型建立后的第8、11、14天向NS组大鼠代膀胱注入生理盐水1 ml；向MMC组注入配制好的0.6 mg/ml丝裂霉素溶液1 ml；上述两组大鼠灌药完毕后保留2 h。 　　1.5 实验观察指标的采集以及留取标本 　　模型建立后的第8、11、14天灌注丝裂霉素-C留取尿液标本，第17天最后一次留取尿液标本后处死大鼠，取代膀胱组织，中性甲醛固定，常规石蜡包埋。 　　1.6 肠黏膜形态学观察 　　观察回肠黏膜层及黏膜下层的组织结构，判定肠黏膜损伤情况采用回肠黏膜评分：绒毛完全坏死（4分）；绒毛中部坏死，肠隐窝清晰可见（3分）；绒毛坏死，局限于顶部（2分）；轻度肠上皮脱落（1分），仅限于黏膜顶部；肠组织正常无坏死（0分）。 　　1.7 黏液组化染色（AB-PAS） 　　黏蛋白含多糖，羧酸化（唾液酸）的黏蛋白呈蓝色。每个标本选择5个绒毛，计算蓝染杯状细胞数以及总杯状细胞数，取平均值。 　　1.8 Muc-2免疫组化染色 　　制备石蜡切片，用SABC法进行免疫组织化学染色。每例观察切片一张，随机选取5个非重叠的视野进行观察计数，计算视野内阳性杯状细胞数。 　　1.9 统计学处理 　　采用SPSS 10.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料均以均数±标准差（x±s）表示，两组间均数比较采用t检验，多组间均数比较采用单因素方差分析（One-Way ANONA），多组连续变量资料采取秩和检验（Kru