乳腺癌患者COX2 mRNA 表达与雌激素受体水平相关性研究.docVIP

乳腺癌患者COX-2 mRNA 表达与雌激素受体水平的相关性研究 　　【摘要】 目的 通过分析人乳腺癌COX-2 mRNA表达与雌激素受体水平的相关性，以探讨COX-2在人乳腺癌发病机制中的作用。方法 选择17例浸润性乳腺癌患者冰冻癌组织，采用定量RT-PCR方法癌组织中COX-2 mRNA水平。用配体结合方法测定雌二醇受体(ER)及孕酮受体(PR)水平。结果 COX-2 mRNA表达与PR呈正相关(P0．05)。结论 人乳腺癌患者COX-2 mRNA 表达与PR水平呈正相关，PR 和COX-2 mRNA测定有助于选择治疗方案和判定预后。? 　　【关键词】COX-2 mRNA; 雌激素受体；孕酮受体；乳腺癌 　　? 　　乳腺癌患者的环氧化酶(COX)-2表达水平升高，且患者预后差[1-2]。研究证明，乳腺癌组织及癌旁组织中COX-2 mRNA水平增高，并与血管内皮生长因子的增高水平(VEGF)呈正相关，表明COX-2在乳腺癌发病机制及肿瘤血管生成过程中起重要作用[3]。雌激素受体-雌二醇受体(ER)和孕酮受体(PR)是乳腺癌患者激素治疗的重要影响因素。本文旨在观察乳腺癌组织中COX-2表达与ER、PR水平的相关性，以探讨COX-2在乳腺癌发病机制及预后中的作用。? 　　 　　1 资料与方法? 　　 　　1．1 材料 选取本院2006年1月至2007年6月经病理检查证实为浸润性乳腺癌患者的癌组织17例，年龄41~67(平均56．7)岁。所有病例术前均未行化疗、放疗及其他辅助治疗。立即经液氮冰冻后于-70℃储存备用。? 　　1．2 ER和PR水平测定 采用改良的葡聚糖被覆活性炭测定ER和PR水平[4]。ER≥3 fmol/mg pro为阳性表达，PR≥5 fmol/mg pro为阳性表达。? 　　1．3 COX-2 mRNA提取 采用RNeasy Mini isolation kit(Qiagen公司,德国)提取细胞RNA，严格按说明书步骤操作。经DNase(Promega公司)处理后用RiboGreen reagent(美国英杰生命技术公司)进行RNA定量测定，严格按说明书步骤操作。实验重复3次。? 　　1．4 COX-2的RT-PCR测定 每份样品采用ABI PRISM 7700 Sequence Detector 和TaqMan EZ RT-PCR Core Reagents Kit(Perkin-Elmer Applied Biosystems，美国)进行RT-PCR定量测定，重复2次。如果测定结果不相近再重复1次。采用Primer Express software(PE-Applied Biosystems,Warrington,英国)设计寡核苷酸类引物。TaqMan探针标记引物序列为5-TTCCTACCACCAGCAACCCTGGCA-3，寡核苷酸正义引物为5-GAATCATTCACCAGGCAAATTG-3和反义引物为5-TTTCTGTACTGCGGGTGGAAC-3。反转录反应条件50℃ 2 min,60℃ 10 min，92℃ 5 min。聚合酶链反应条件为92℃ 20 s，62℃ 25 s，共50个循环。用系列稀释的单链正义寡聚核苷酸扩增子绘制标准曲线用于定量每μg RNA的mRNA拷贝数。? 　　1．5 统计学方法 采用SAS6．11软件包进行Kruskal-Wallis检验。? 　　 　　2 结果? 　　 　　2．1 COX-2 mRNA 表达结果 17例浸润性乳腺癌组织均检测到COX-2 mRNA表达，拷贝数为15 649~2 033 089(平均131 668)/μg RNA。见表1。? 　　2．2 ER和PR的表达结果 ER表达阳性者1例，PR表达阳性者7例。见表1。? 　　2．3 COX-2 mRNA拷贝数与ER、PR阳性表达的相关性 COX-2 mRNA拷贝数与PR表达阳性有相关性(P0．05)。? 　　 　　 　　3 讨论? 　　 　　环氧化酶(COX)是前列腺素合成过程中的重要限速酶，可将花生四烯酸代谢成各种前列腺素产物，从而维持机体的各种生理和病理过程。环氧化酶至少有2种形式:COX-1和COX-2。COX-2静息时并不表达，但在细胞因子、生长因子、癌基因等刺激因子的作用下可被诱导表达，参与炎症反应、细胞增殖及分化过程。近年来许多证据表明，COX-2与肿瘤的发生发展有关。Liu等[5]在转基因小鼠模型中发现COX-2的过度表达可以诱导乳腺癌的发生。Sivula等[6]研究发现浸润性乳腺癌组织中COX-2的阳性表达率为66%,COX-2阳性者预后不佳。又有动物实验证明了COX-2 抑制剂可以预防乳腺癌的发生[7]。? 　　有研究表明在乳腺上皮的