代谢组学血浆样品前处理及其快速高分辨液相色谱.docVIP

PAGE PAGE 1 代谢组学血浆样品前处理及其快速高分辨液相色谱?质谱分析方法研究 　　摘 要 采用快速高分辨液相色谱?质谱联用技术，对代谢组学研究中血浆样品的前处理方法进行了考察及优化，建立了用于血浆中小分子代谢物分析的前处理方法。通过考察有机溶剂沉淀蛋白（不同溶剂系统）和固相萃取（Solid phase extraction, SPE）两种方法对血浆中蛋白质去除程度及16个代表性化合物的提取效果，确定采用乙腈沉淀蛋白法；进一步对乙腈沉淀蛋白法进行了细致的优化，确定使用3倍体积的冷藏乙腈慢速沉淀可以达到最佳的处理效果。对血浆中10种代表性化合物进行了方法学考察，结果表明，本方法重现性、精密度及样品冻融稳定性均良好。对穿插在检测序列中的生物质控样本检测结果进行主成分分析（Principal component analysis, PCA），证明本方法在代谢组学研究中的可重复性及获得的数据的可靠性良好，适用于代谢组学研究。 　　关键词 代谢组学； 血浆前处理方法； 快速高分辨液相色谱?质谱联用技术? 　　1 引 言 　　? 　　代谢组学是研究生物体内源性代谢物的整体及其变化规律的科学??[1～4]?，作为系统生物学的重要组成部分得到了迅速发展，并在制药、药物毒理等领域得到了成功应用??[5～9]?。人体血浆作为代谢组学研究中的重要体液样本，其中含有2000多种内源