三动物细胞融合与单克隆抗体.PPTVIP

生物法（病毒诱导融合） 诱导方法： 化学法（聚乙二醇诱导融合） 物理法( 电场诱导融合) 1.什么是细胞融合？ 2.诱导细胞融合的方法有哪一些？ 3.植物体细胞杂杂交过程中必须去除其什么结构 ？用什么办法去除？动物细胞需要么？ 采用自然或人工的方法使两个或多个不同细胞融合成一个细胞。 细胞壁 酶解法 不需要 温故知新 1、定义：在一定的条件下法使两个或多个不同的动物细胞融合成陈一个细胞的过程。 三.动物细胞融合与单克隆抗体 （一）动物细胞融合 融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。 2、原理： 细胞膜的流动性 物理法： 化学法： 生物法： 电激、离心、振动 聚乙二醇（PEG) 灭活的病毒 4.意义： 3.诱导融合的方法 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。 病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜连接 细胞膜被 病毒颗粒穿通 细胞融合、形成杂种细胞 2．诱导动物细胞融合与植物细胞杂 交融合的方法有什么不同？ 动物细胞融合能用灭活的病毒进行诱导。 1．动物细胞融合的结构基础是什么？ 　细胞膜的流动性。 合作探究一 3．若只考虑两两融合，则诱导细 胞融合后可能形成几种融合细胞？ 融合后的细胞在遗传上有何特点？ 三种融合细胞，即同种细胞融合(两种) 和不同种细胞融合(一种)。 特点：具有两个细胞的遗传信息。 生物种间杂交想图 已成功的动物细胞融合实例有很多，如人—小鼠、人—兔、人—鸡、鼠—兔、鸡—鼠等上百种融合细胞。两种不同的动物细胞融合融合之后形成的动物杂种细胞，能像植物组织培养那样发育成为一个完整的个体么？ 生物基因的表达不是孤立的，它们之间是相互调控、相互影响的，杂种细胞中虽然具备两个物种的遗传物质，但这些遗传物质的表达受到相互干扰，不能再像没有融合之前那样有序的表达。 1.抗体是由何种细胞产生的？ 温故知新 2.抗体是如何产生的？ （二）单克隆抗体 从血清中分离抗体 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 多种效应B细胞 动物体内 多种抗体 抗原 筛选单一 浆细胞 3.传统制备抗体的方法是？ 4.传统制备抗体的缺点是？ 1.单克隆抗体概念 用单个B淋巴细胞进行（无性繁殖）克隆，得到的基因型相同的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。 1.在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞有没有可能无限增殖？ 不可能 2.我们学过的什么细胞具有这样的能力？ 癌细胞 3.你有什么办法让B淋巴细胞既能产生抗体又能无限增值？ 细胞融合 （二）单克隆抗体 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 杂种细胞 动物细胞培养技术 动物细胞融合 创始人：米尔斯坦 单克隆抗体 既能产生特异性抗体，又能大量繁殖 柯勒 米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。 杂交 细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 2.单克隆抗体的制备过程 动物特异性免疫 分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn） 细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。） 第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。提取单克隆抗体。 1．制备单克隆抗体时，为什么要对小鼠注射抗原？ 以获得能产生相应抗体的B淋巴细胞(浆细胞)。诱导融合的B淋巴细胞是经免疫产生的B淋巴细胞，未经免疫的B淋巴细胞不能产生抗体。 每一个B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，但不能无限增殖； 骨髓瘤细胞可大量快速增殖，却不能产生抗体。将两种细胞 融合形成的杂交瘤细胞，既能产生特异性抗体又能快速增殖。 3．细胞融合后会得到哪些杂交细胞？我们需要的是哪 种杂交细胞？ 融合后形成的杂交细胞有多种，若仅考虑细胞两两融合的 情况，融合细胞有三种，即两个B淋巴细胞的融合细胞、两 个骨髓瘤细胞的融合细胞、一个B淋巴细胞与一个骨髓瘤细 胞的融合细胞。其中最后一种是我们需要的。 合作探究二 2．制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴