高效液相色谱检测微生物细胞醌类组分技术规程.docVIP

高效液相色谱(HPLC)检测微生物细胞 醌类组分的技术规程 起草单位：中国典型培养物保藏中心  目 次 TOC \o 1-2 \h \z \u HYPERLINK \l _Toc 前 言 PAGEREF _Toc \h 3 HYPERLINK \l _Toc 1. 范围 PAGEREF _Toc \h 4 HYPERLINK \l _Toc 2. 术语与定义 PAGEREF _Toc \h 4 HYPERLINK \l _Toc 2.1. 菌体真空冷冻干燥（freeze-drying） PAGEREF _Toc \h 4 HYPERLINK \l _Toc 2.2. 高效液相色谱（HPLC） PAGEREF _Toc \h 4 HYPERLINK \l _Toc 2.3. 旋转蒸发 PAGEREF _Toc \h 4 HYPERLINK \l _Toc 2.4 保留时间Ret.Time(RT) PAGEREF _Toc \h 4 HYPERLINK \l _Toc 3. 方法和条件 PAGEREF _Toc \h 4 HYPERLINK \l _Toc 3.1. 试剂 PAGEREF _Toc \h 4 HYPERLINK \l _Toc 3.2. 主要仪器与器材 PAGEREF _Toc \h 4 HYPERLINK \l _Toc 4. 醌样品的制备 PAGEREF _Toc \h 4 HYPERLINK \l _Toc 4.1 收集菌体 PAGEREF _Toc \h 4 HYPERLINK \l _Toc 4.2 破壁 PAGEREF _Toc \h 4 HYPERLINK \l _Toc 4.3 旋转蒸发 PAGEREF _Toc \h 4 HYPERLINK \l _Toc 4.4 纯化 PAGEREF _Toc \h 5 HYPERLINK \l _Toc 5. 高效液相色谱(HPLC)测定醌类组分 PAGEREF _Toc \h 5 HYPERLINK \l _Toc 5.1. 准备工作 PAGEREF _Toc \h 5 HYPERLINK \l _Toc 5.2 色谱条件 PAGEREF _Toc \h 5 HYPERLINK \l _Toc 5.3 结果分析 PAGEREF _Toc \h 5 HYPERLINK \l _Toc 参考文献 PAGEREF _Toc \h 6 前 言 醌是微生物化学分类指征之一，它是原核生物原生质膜上的组份，在电子传递和氧化磷酸化中起重要作用。醌主要有两种类型:甲基萘醌和泛醌。在革兰氏阳性细菌和放线菌中主要合成甲基萘醌。醌类组分中异戊二烯侧链的长度和氢的饱和度有重要的分类学意义。 每种细菌都有一个主要的醌类组分，一个微生物群体中醌类种类和数量的不同反映了群体组成的多样性，醌类谱已经作为细菌群体组成多样性的一个指标，在环境微生物中广泛使用。高效液相色谱测定醌类更快速，灵敏度高，操作简单，是一种醌类组分测定的理想方法。 制定本规程的目的在于提供了一种原核生物中醌类提取与HPLC检测的有效技术。本规程由武汉大学中国典型培养物保藏中心起草承担。 高效液相色谱(HPLC) 检测微生物细胞醌类组分的技术规程 范围 本规程规定了高效液相色谱(HPLC)检测微生物细胞醌类组分的技术规程，本规程主要适用于细菌等原核生物醌类组分的检测。 术语与定义 下列术语和定义适用于本规程 菌体真空冷冻干燥（freeze-drying） 指将欲干燥的菌种细胞或孢子，经预冻后在真空条件下使水分升华。 高效液相色谱（HPLC） 高效液相色谱用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入待测样品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。 旋转蒸发 在减压条件下连续蒸馏大量易挥发性溶剂，尤其对萃取液的浓缩和色谱分离时的 接收，可以分离和纯化反应产物。 保留时间Ret.Time(RT) 是指被测组分从进样开始到柱后出现浓度最大值时所需的时间，等于组分在流动相中停留的时间加在固定相中所停留的时间。 方法和条件 试剂 醌提取试剂：氯仿；甲醇；丙酮；苯；GF254硅胶板(青岛海洋化工厂分厂，100×200 mm)；试剂均为分析纯。 HPLC检测试剂：甲醇（色谱纯）；异丙醇（色谱纯）；超纯水 主要仪器与器材 高效液相色谱仪；旋转蒸发仪 醌样品的制备 4.1 收集菌体 菌体摇瓶培养，通过离心收集菌体，蒸馏水洗涤两次，离心后真空冷冻干燥，如果暂时不进行制备，菌粉可以于4 oC保存备用。 4.2 破壁 取冻干菌体约100