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生化实验技术 离心技术 你能回答遇到过这些的问题吗 1.离心力的大小是由那些因素决定的？ 2.不同型号的离心机可以互换使用吗？ 3.什麽是相对离心力？g代表什麽？ 4.离心时间越长是否离心效果越好？ 5.科学的离心时间是如何决定的？ 6.离心一般能获得纯净的样品吗？ 7.如何能获得满意的重复离心效果？ 离心力的影响因素 F=ω2r ω (角速度，单位 弧度/秒） =2π(rpm/60) rmp= 转数/分钟 r =离心半径（cm） 影响离心力的两大因素 1. 离心机转数（rpm） 2. 离心半径（r ） 换用不同型号的离心机时，你不能只考虑离心机转数而忽视离心机半径。不同型号和半径的离心机在相同转数时会产生大小不同的离心力，也就会产生不同的离心效果。 相对离心力（RCF） RCF (relative centrifuge force) RCF= ω2r/980 （单位为 g） = (2πrpm/60)2 r/980 X g = (0.1047rpm)2/980r X g = 11.2 x (rpm/1000)2 r X g g 就是标准条件下的地心引力 离心技术的基本目的 1.最大程度地富集目的颗粒。 2.最大程度地减少非目的颗粒。 问题是在同一离心力作用下,所有的颗粒均会以不同的速度沉淀。如何能够有效的达到上述的基本目的，这就是我们要考虑和必须回答的问题。 离心技术的几个重要基本概念 1.沉降速度(S)：我们要了解和比较不同 颗粒的沉降速度。 2.澄清时间(T)：一般而言，离心不是离 心时间越长越好，我们要确定或估算最 佳的离心时间。 3.K因子：完成同样的工作，不同的离心 机或转头效果不同，我们要规范地评价 离心机或转头的效率。 沉降系数 S--1 1. S 为沉降系数（sedimentation coefficient) 的简称。 2. 沉降系数是被分离颗粒在单位离心力场下的沉降速度。S=dr/dt x 1/w2r 3. 沉降系数的单位为10-13秒，简称S，以纪念超速离心机的创始人Sverdberg 沉降系数--2 1.颗粒的沉降系数S主要决定于颗粒与溶液的密度差，也与颗粒的形状和溶液的黏度等因素有关，因此S值的研究可用于分子量的测定和分子构象的研究，在核酸的研究中，s值也常常被用来表示生物大分子的特征。 2.原核生物的核蛋白体为70S，其由30S的小亚基和50S的大亚基组成；而真核生物的核蛋白体为80S，其由40S的小亚基和60S 的大亚基组成。 澄清时间（T值）--1 1.所谓澄清时间就是在特定的离心条件下位于离心管顶的颗粒到达离心管底所需要的最短时间。 2.确定澄清时间具有重要的意义，因为短于澄清时间，不能获得全部的离心目的颗粒；长于澄清时间，不仅是时间和设备的浪费，而且有可能使非目的颗粒增加。 澄清时间（T值）--2 1 Lnrt - Lnr0 t1-t0 = ---- x ---------------- S ω2 澄清时间与颗粒的沉淀系数S成反比，与离心机的重要参数（ Lnrt - Lnr0）/ω2成正比，即与所使用的离心机或使用的转头有关。 转头的特征性常数—K因子 1. K因子是表示转头离心效率的指标。 2. 确定转头K因子的因素有两个：一 是离心的距离（r）；二是允许的最 高转数（角速度ω）。 3. K factor = Lnrt - Lnr0 / ω2 ω 是指该转头的最大允许角速度 S，T 和K之间的关系 K 最高转数 T =--------------- x (----------------)2 S 实际转数 离心能够获得纯净样品吗? 1.在混合溶液中，通过离心技术一般不能获得纯净的样品。 2.通过对离心沉淀颗粒的溶解再离心一般可以增加沉淀颗粒的纯度，即所谓对沉淀的“洗涤”。 3.对沉淀的“洗涤”可以提高沉淀的纯度，但同时也必然造成沉淀样品的丢失。 你能回答遇到过这些的问题吗 1.离心力的大小是由那些因素决定的？ 2.不同型号的离心机可以互换使用吗？ 3.什麽是相对离心力？g代表什麽？ 4.离心时间越长是否离心效果越好？ 5.科学的离心时间是如何决定的？ 6.离心一般能获得纯净的