第五章 基因工程菌苗研究的现状与 及.ppt

第六章 基因工程菌苗研究的现状与发展(Status and development of gene engineering bacteria vaccine);表6-1 新鉴定的病原体 ;1982 ;1993;新病原体不断出现与鉴定，新的疫苗研制也相继开始。 重要病原体全基因测序的开展和完成，及类似生物表型的不同菌属间的同源序列和异源序列的发现，对抗感染研究来说，像进行了一场革命，不仅会促进病原体致病和发病机制的研究，也会开阔和调整菌苗研究的策略和思路。 目前已完成500余种病毒的全基因测序，关于重要病原菌全基因测序进展情况列于表5-2。 ;完成的;E.coli K12; 总之，已控制传染病的再现及新传染病的出现，已引起全球的注意，对传染病威胁需要再认识，已有共识。因此，有必要加快进行创新性的细菌菌苗的研制与开发。 ;第二节 目前应用的菌苗及其存在问题 Present bacteria vaccine and the question;1、减毒的活菌苗（Attenuated bacteria vaccine） 如卡??苗（BCG），是巴斯德研究院A. Calmette和Guerin,C等（1921）将一株牛型强毒结核菌在甘油-胆汁-马铃薯培养基上传230代后（13年），获得的对动物不致病，但产生抗结核免疫反应的菌苗即BCG。对免疫婴幼儿有保护效果。 后来发现对成人的保护效果波动范围很大，对其减毒机制始终不清。直至近年来完成结核分枝杆菌全基因测序后，与有毒牛型结核分枝杆菌全基因序列进行比较，方知BCG缺失了毒力相关基因。 总之，对胞内菌目前还是用减毒的活菌苗。 ;2.灭活菌苗 （Dead bacteria vaccine） 通过加热处理或福尔马林（formaldehyde）、戊二醛（glutaraldehyde）、β-内酯（β-propiolactone）、等化学处理得到 如霍乱死菌苗，百日咳（Bordetella pertussis）死菌苗等。死菌苗的主要优点是稳定，缺点是需要多次免疫才能得到好的保护效果。 ;3.亚单位或成分苗 （Subunit bacteria vaccine） ①从细菌培养液中提取、用化学方法脱毒的类毒素苗，如破伤风类毒素（TT）、白喉类毒素（DT），免疫后诱导机体产生的抗血清能特异中和TT破伤风类毒素或DT白喉类毒素，其保护效果可达95%以上。由于毒素纯化方法的改进，产品的副作用很小； ;②荚膜细菌纯化的多糖菌苗，可诱导产生的抗体能保护机体抵抗入侵荚膜菌的感染。如嗜血性流感杆菌b(Hib)、伤寒杆菌Vi多糖等多糖苗，能诱导机体产生T细胞非依赖的抗体反应，其特点是诱导产生短期的IgM抗体，缺乏免疫记忆，对不到18个月幼儿的多糖苗免疫原性差，而没有保护效果。因此多糖类的菌苗急需改进。 ;③目前，将多糖与载体蛋白共价连接，通过载体蛋白提供适当的T细胞表位，由T细胞协助B细胞产生多糖特异性抗体，使T细胞非依赖性抗原转变为T细胞依赖抗原，这类菌苗称为多糖-蛋白结合苗。如嗜血流感杆菌Hib的结合苗已在几个国家获得证书，证明对不到18个月的儿童有很高的免疫原性，能诱导免疫记忆，免疫球蛋白的类型转换及抗体亲和力成熟，明显减少Hib菌的入侵感染与发病。; ; 菌苗 ; 菌苗 ; 菌苗 ;（二）研制菌苗的新方法（New method of produce bacteria vaccine） 1、研制菌苗的新方法（new methods） 对细菌感染发病机制认识的深入及涉及许多病原体毒力决定簇如黏附素、侵袭素、荚膜多糖、脂多糖、毒素等编码基因及其产物的结构与功能的分析与鉴定，是不断设计和研制新型疫苗的重要基础。 针对不同的病原体致病特点和毒力决定簇的特点，发展和产生了不同的菌苗研制方法，得到不同类型的菌苗。 现将目前研制菌苗的新方法及可能的后选菌苗列于表5-4 。;表6-4 目前研制菌苗的新方法及可能的候选菌苗 ; 4 ;2.目前菌苗存在的问题（questions） （1）尽管疫苗免疫取得了巨大的成功，但小于5岁的婴幼儿每年死于传染病的数目仍然很高。如疟疾几种腹泻病等均无有效疫苗，虽然卡介苗（BCG）使用几十年了，甚至纳入WHO的计划免疫，但其效果波动很大0%-80%。因此急需安全有效的结核菌苗问世。 ;（2）与病毒相比：①基因工程菌苗及细菌核酸苗报导明显为少。至今国际上还没有成功满意的重组细菌苗提供人群使用。关于细菌毒素的分子及其编码基因与调控机制都比较清楚，因此，有关毒素的基因工程菌苗的构建或载体构建等均无问题。②但细菌外膜上的其它结构如黏附分子，侵袭蛋白，鞭毛及脂多糖等分子结构十分复杂，编码基因多呈丛分布，如LPS的表达涉及近30个基因的级联反