拟南芥AtMGT3基因转运功能研究.docVIP

拟南芥AtMGT3基因转运功能研究 　　摘 要：对拟南芥AtMGT3基因的Mg2+转运功能进行了初步研究，AtMGT3转录本的半定量分析表明，AtMGT3在根、茎、叶、花、角果中均有表达，但在花中表达量最高，根中最少，MM281功能互补和液体生长曲线结果表明：AtMGT3功能互补细菌Mg2+转运突变株，具有Mg2+转运能力；AtMGT3介导Mg2+的低亲和性吸收，是一个低亲和性Mg2+转运蛋白；AtMGT3可能还能转运Fe2+，但转运Fe2+浓度超出了正常的生理浓度，在正常生理条件下，At-MGT3的主要生理功能是作为Mg2+转运蛋白起作用。 　　关键词：AtMCT3；功能互补分析；低亲和Mg2+转运蛋白 　　中图分类号：Q943　文献标识码：A　文章编号：1007-7847(2007)04-0328-06 　　 　　Mg2+是植物细胞中最丰富的二价金属离子，其在一系列酶促反应中作为辅因子起作用，Mg2+是构成叶绿素的主要组成成分和酶的活化剂，参与脂肪代谢，促进磷素的转运以及某些维生素的合成；并且参与维持细胞膜的稳定；Mg2+对植物液泡离子通道以及叶绿体RNA的稳定性都有重要的调控作用，缺失足够的Mg2+，核糖体亚单位将会分离，同时细胞膜也会变成松弛渗漏的状态，离子状态的镁调节许多重要的酶促代谢，还可通过特定的金属结合位点在膜蛋白通道中起作用。 　　由于Mg2+独特的几何特性和化学特性，有人猜测其转运系统也具独特性，细菌中的研究支持该假说，目前，整个生物界中已发现有五大Mg2+转运家族：CorA家族、Mg2+/H+交换体、离子通道、P型磷酸酶和MgtE基因家族，主要的Mg2+转运家族是细菌中的CorA家族，CorA序列上存在保守基序GMN，是其转运Mg2+所必需的，若GMN基序中有一个氨基酸突变，其转运能力就会丧失，ALRl和ALR2是在酵母中发现的一类CorA基因，在酵母中过量表达ALR蛋白可提高其对铝毒害的抗性，MgtA/B是5，typAimurium中发现的另外两个具Mg2+转运能力的基因，两个都是大的复合跨膜蛋白，属于P型磷酸酶家族，它们的表达受到低浓度Mg2+的诱导。 　　到目前为止，在高等植物中鉴定出两类具Mg2+转运活性的转运蛋白：一类是Mg2+/H+交换体，它是一类质子依赖性转运蛋白；另一类是CorA-like镁离子转运蛋白。 　　1999年Shaul在模式植物拟南芥中克隆到一个在液泡膜上编码转运蛋白的基因AtMHX，AtMHX是第一个从多细胞有机体中克隆到的Mg2+转运蛋白，也是在植物中首个被发现的Mg2+/H+交换蛋白。其作为一种Mg2+(Zn2+)/H+交换蛋白发挥作用Ls，Northern杂交分析显示，AtMHX mRNA在拟南芥的各个组织中均有表达。 　　CorA家族是五大Mg2+转运基因家族最大的一个，其广泛存在于细菌、真菌、酵母、哺乳动物和高等植物中，其蛋白具有独特的拓扑结构，2002年Li等在拟南芥中鉴定出一个与细菌CorA同源、蛋白结构相类的AtMGT家族，此家族有10个成员，成员的氨基酸序列多样，氨基酸的同源性范围从15％～89％，在家族的系统发育中，AtMGTl和AtMG72，AtMGT5和AtMGT6，AtMGT7、tMGT8和AtMGT9各自成簇，亲缘关系较近，而且tMGTIO在系统发育中另外分支，与其它成员亲缘关系较远。 　　目前AtMGT基因家族已有的研究表明，AtMGT家族存在两种Mg2+转运蛋白：高亲和性Mg2+转运蛋白和低亲和性Mg22+转运蛋白。高亲和性Mg2+2+的转运是在低浓度范围内进行的，其主要依靠转运体来完成，拟南芥AtMGT家族中的AtMGT1、AtMGT2和AtMGT10这3个蛋白的氨基酸序列上都含有2个疏水的跨膜区，并且第2个跨膜区上都有保守基序GMN，已鉴定属于高亲和性Mg2+转运蛋白，AtMGTl功能互补细菌Mg2+转运突变体，不仅能转运Mg2+，还能转运别的二价阳离子如：Fe2+、Mn2+、Cu2+、CO2+等，但转运这些阳离子的浓度都超出了植物正常生长的生理浓度，因此该基因的功能主要是进行Mg2+转运，AtMGT2参与呼吸作用，AtMGT10功能互补酵母M广转运突变体，定位于质膜上，低亲和性Mg2+转运是在外界Mg2+浓度为m mol/L级进行转运，且在生理浓度范围内不会达到饱和，已从AtMGT家族中鉴定出第一个低亲和性Mg2+转运蛋白-AtMGT7，通过MM281功能互补发现AtMGT7转运Mg2+的能力受到pH值的影响，本研究的对象AtMGT3亦属于低亲和性Mg2+转运蛋白， 　　多个转运蛋白基因与Mg2+转运有关，它们可能在植物细胞不同的膜上起作用，除了质膜外，细胞中还有很多其它细胞器膜，如线粒体膜、叶绿体膜、液泡膜、高尔