免疫组化指标在卵巢支持―间质细胞瘤与卵巢子宫内膜样腺癌鉴别诊断中意义.docVIP

免疫组化指标在卵巢支持―间质细胞瘤与卵巢子宫内膜样腺癌鉴别诊断中意义 　　【摘要】 目的 探讨免疫组化指标在卵巢肿瘤诊断中的应用价值。方法 选取病理诊断为支持-间质细胞瘤、卵巢子宫内膜样腺癌的石蜡标本各44例， 分别为实验组和对照组， 进行常规石蜡制片， 用肌酸激酶（CK）、波形蛋白（Vimentin）、CD99、抑制素-α（Inhibin-α）进行免疫组化染色并对染色结果进行镜下观察分析。结果 CK、Inhibin-α及CD99在两种不同肿瘤细胞中的表达率差异具有统计学意义（P0.05）。结论 CD99、CK、Inhibin-α在卵巢支持-间质细胞瘤和卵巢子宫内膜样腺癌的诊断及鉴别诊断中具有重要意义和临床应用价值， 而Vimentin意义不大。 　　【关键词】 CD99；肌酸激酶；免疫组化 　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.29.014 　　支持细胞-间质细胞瘤又称为卵巢睾丸母细胞瘤或者卵巢男性母细胞瘤， 属于一类较为罕见的卵巢间质细胞肿瘤， 根据肿瘤细胞类型可以分为纯支持细胞肿瘤、纯间质细胞肿瘤和支持细胞-间质细胞肿瘤三种。卵巢子宫内膜样腺癌是发生于卵巢的与子宫体的子宫内膜样癌相似的恶性肿瘤。在临床的病理分析中有少数卵巢子宫内膜样癌出现局灶或广泛的、与支持-间质细胞瘤类似的区域， 表现为小的、分化良好的、中空性的、实性的小管， 或与性索类似的细胞索， 容易造成诊断上的困难， 特别是当肿瘤间质黄素化且患者有男性化表现时常易误诊为支持-间质细胞瘤， 一旦出现误诊会延误治疗时间造成病情拖延。单单靠普通HE染色进行病理诊断结果并不十分准确， 对于有些不典型的病例应运用特定的敏感性高以及特异性强的免疫组化标记物来增加诊断及鉴别诊断的准确性， 因此如何准确找到标记物对医疗工作者来说就是重中之重。本实验旨在探讨CK、Vimentin、CD99、Inhibin-α在卵巢支持-间质细胞瘤与卵巢子宫内膜样腺癌诊断中的应用价值及鉴别诊断意义， 现报告如下。 　　1 材料与方法 　　1. 1 材料 选取山东省枣庄市立医院病理科2008年1月～ 2011年12月常规石蜡切片病理诊断为支持-间质细胞瘤的石蜡标本44例， 作为实验组， 选取病理诊断为子宫内膜样腺癌的石蜡标本44例， 作为对照组， 进行常规石蜡制片和免疫组织化学染色。将石蜡标本冷却处理后切片， 每个标本分别切取用于常规HE染色的片子一张和用于免疫组化染色的片子八张以备用。两组一般资料比较差异无统计学意义（P0.05）， 具有可比性。 　　1. 2 方法 ①常规制片：第一步是烤片：将用于HE染色的玻璃片插入至染色架中于80℃烘箱0.5 h进行烤片使石蜡溶化组织牢固贴于载玻片上；第二步是脱蜡：0.5 h后从烘箱取出， 为了避免石蜡在室温中再次凝固影响脱蜡效果必须迅速将染色架放入二甲苯中进行脱蜡5 min共三缸；第三步是水化：将脱蜡后的组织依次浸入浓度梯度分别为100%、95%、85%、75%和50%的乙醇， 最后用水洗去残余乙醇；第四步是苏木染色：先用哈氏苏木素染色10 min， 清洗洗去残余苏木染料， 将染色架放入浓度为0.4%盐酸酒精中进行分化， 除去胞浆中的苏木染色和细胞核上过多的苏木染料， 迅速入水洗去盐酸以防过度脱色， 流水中冲洗10 min进行返蓝处理， 然后入伊红浸泡10 s， 75%乙醇浸泡10 s使伊红均匀着色；第五步是脱水：依次进入85%、95%、95%、100%、100%的乙醇中各3 min；第六步是透明：最后浸泡三缸二甲苯透明；第七步是中性树脂封片。②免疫组化：第一步烤片：将常规石蜡切片插入至染色架中， 放入温度为60℃的烘箱40 min；第二步脱蜡：40 min后从烘箱取出， 将染色架放入三缸二甲苯中进行脱蜡各5 min；第三步水化：将脱蜡后的组织依次浸入与常规制片水化步骤相同浓度梯度的乙醇， 最后用水洗去残余乙醇， 最后用蒸馏水洗涤3次；第四步抗原修复：将切片转移小盒内并放入柠檬酸三钠溶液， 煮沸水浴99℃ 10 min， 保温10 min；第五步加入一抗：自然冷却后用TBS溶液洗涤3～5次， 将载玻片上组织周围的水分擦干后放入湿盒内， 加入第一抗体， 要注意抗体的加入量应该比组织面积稍大一点， 目的是防止组织干燥产生非特异性染色， 盖上湿盒盖子并孵育1 h；第六步加入二抗：1 h后用TBS溶液冲洗掉组织切片上的第一抗体， 然后继续用TBS洗涤3次， 将组织周围水分擦干后加入第二抗体并孵育40 min；第七步DAB显色：用TBS冲洗掉第二抗体， 继续洗涤3次， 将组织周围擦干后加入DAB显色剂， 肉眼结合镜下检查控制显色；第八步观察：对比观察各种免疫组化指标在卵巢支持-间质细胞瘤和卵巢子宫内膜样腺癌细胞中的染