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组织DNA的提取与纯化 检验系生化教研室 陈宁 讲课内容 一、概述 DNA在生物组织中以核蛋白的形式存在于细胞核中。 单倍体人类DNA平均相对分子量为6×1010 道尔顿，相当于1.3×105kb。 二、实验原则 保证DNA一级结构的完整性 排出其他干扰性分子的污染 三、实验操作及相关试剂介绍 【实验方法】 物理方式：玻璃珠法 超声波法 研磨法 冻融法 化学方式：异硫氰酸胍法 酚-氯仿抽提法 碱裂解法 生物方式：酶法 思考题 整个实验过程中，一共有几次离心？每次离心的作用是什么？各个分层中的内容是什么？ * 概述 1 试验原则 2 实验操作及相关试剂介绍 3 注意事项 4 DNA的分类有： 真核DNA 细菌DNA 病毒DNA 质粒DNA DNA样品的来源： 组织 – 肝脏、赘生物、肌肉、培养细胞 血液 细菌 – 培养细菌、质粒 干扰分子 对酶有抑制作用的物质 样品中存在的其他生物大分子 有机溶剂、高浓度的金属离子等 蛋白质、多糖和脂类 应尽量将此类物质的浓度降低到最小程度 相应抽提对象之外的核酸污染 DNA抽提时，应避免RNA干扰