第九章血脂与血浆脂蛋白检验.pptVIP

实验操作 LDL分离 于小离心管中加血清200uI和沉淀剂100uI，混匀， 室温（20 ℃，不得高于30℃ ）放置15min，然后3000rpm离心 15min，取上清液与血清同时测定胆固醇。 取3支试管，按下表操作 加入物（ml） 标准管 测定管1 测定管2 空白管 标准液 0.03 -- — — 上清液 -- 0.03 -- — 血清 -- -- 0.03 -- 蒸馏水 -- 酶试剂 2.00 -- 2.00 -- 2.00 0.03 2.00 混匀，置于37℃水浴箱，放置5分钟，以空白管调零点，在 500nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。 计算 测定管1吸光度 上清血清胆固醇浓度= -----------------------× 胆固醇标准液浓度 标准管吸光度 测定管2吸光度 总胆固醇浓度= -----------------------× 胆固醇标准液浓度 标准管吸光度 上清LDL-C = TC - 上清液胆固醇浓度 参考范围 40岁以上成人 2.70~3.10 mmol/L 合适水平 3.36 mmol/L 危险水平 4.41 mmol/L 【临床意义】 LDL-C水平与冠心病的发病率呈正相关 LDL-C增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素 由于TC水平同时也受HDL-C水平的影响，所以最好以LDL-C代替TC作为冠心病危险因素指标。 临床上以LDL-C水平作高脂蛋白血症的治疗决策及其需要达到的治疗目标。 简介 ApoAⅠ 是HDL的主要结构蛋白 约占HDL蛋白总量的64% ApoB100 是LDL的主要结构蛋白 约占LDL蛋白总量的95% 因此， ApoAⅠ和 ApoB100 可以直接反映HDL和LDL的含量。 血清载脂蛋白测定 免疫化学法： 单向免疫扩散（RID） 电免疫分析（如火箭电泳法） 放射免疫分析（RIA） 酶联免疫吸附分析（ELISA） 免疫浊度法等 早期 目前： 目前比较适合于临床实验室的是免疫浊度法，包括 免疫散射比浊法（INA）和免疫透射比浊法（ITA）。 免疫透射比浊法 原理 光线通过特异性抗原抗体复合物溶液时被吸收和散射， 使透射光减弱，其减弱程度与免疫复合物含量成正比，即与 抗原含量成正比。 试剂与器材 1、磷酸盐氯化钠缓冲液 2、200g/L 聚乙二醇磷酸盐缓冲液 3、40g/L 聚乙二醇磷酸盐缓冲液 4、8mol/L 尿素溶液 5、抗血清 6、器材 试管、刻度吸管、微量加样器、分光光度计、 离心机 ApoAⅠ测定实验操作 1、稀释抗血清 2、稀释血清标本 用尿素做1：40稀释 取3支试管，按下表操作 加入物（ml） 测定管 标准管 空白管 1：40稀释血清 0.04 0.04 — 聚乙二醇磷酸盐溶液 — -- 0.04 1：40稀释抗血清 1.00 -- 1.00 40g/L PEG-PBS -- 1.00 -- 混匀，置于室温，放置1h，以 40g/L 聚乙二醇磷酸盐缓冲液 零点，在340nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。 计算 吸光度差值 = 测定管吸光度 – 空白管吸光度 - 抗体空白管吸光度 用吸光度差值在标准曲线上查得结果。 【标准曲线】 参考血清用8g/L尿素作1：120、1：60、1:40、1：30、 1：20稀释，按上述操作测得各管吸光度，以ApoAⅠ浓度为横坐 标，以吸光度差值制作标准曲线。 ApoB 测定实验操作 1、稀释抗血清 用40g/L PEG-PBS 1：80稀释 2、稀释血清标本 用聚乙二醇磷酸盐溶液做1：10稀释 取3支试管，按下表操作 加入物（ml） 测定管 标准管 空白管 1：10稀释血清 0.04 0.04 — 聚乙二醇磷酸盐溶液 — -- 0.04 1：80稀释抗血清 1.00 -- 1.00 40g/L PEG-PBS -- 1.00 -- 混匀，置于室温，放置30min，以 40g/L聚乙二醇磷酸盐缓冲 液零点，在340nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。 计算 吸光度差值 = 测定管吸光度 – 空白管吸光度 - 抗体空白管吸光度 用吸光度差值在标准曲线上查得结果。 【标准曲线】