第二章 生物样品制备.pptxVIP

第二章 生物样品的制备;目 录;分析对象： 生物大分子----蛋白质、多肽、核酸、多糖 生物小分子----具有生物活性的小分子化合物（内源性小分子、外源性小分子） 复杂性：组成、含量、动力学范围、时空依存性;;制备生物分子的基本原则： （1）确定要制备的生物分子的目的和要求 （2）掌握目标产物的物理、化学及生物学性质 （3）生物材料的破碎和预处理 （4）分离纯化方案的选择和探索 （5）选择相应、可靠的分析技术 （6）产物的浓缩、干燥和保存 ;样品处理需要考虑的生物分子的物理、化学及生物学性质： （1）在水和各种有机溶剂中的溶解度 （2）在不同温度、pH的溶液和各种缓冲液中的稳定性 （3）固态时对温度、含水量和冻干时的稳定性 （4）各种物理性质—分子大小、穿膜能力、带点情况、离心沉降表现 （5）化学性质—对各种化学试剂的稳定性 （6）对其他生物分子的亲和力 （7）在细胞内的定位等 ;分离纯化基本原理： 利用混合物中几个组分分配系数的差异 物理力场;;植物材料： 季节性、地理位置、生长环境 动物材料：年龄、性别、营养状况、遗传因素、生理状态 微生物：菌种代数、培养基成分之间的差异;材料选定后加工处理： 动物组织：去结缔组织、脂肪、破碎细胞 植物：去壳、除脂 微生物：菌体与发酵液分开 生物材料-----冰冻保存 ;;2.3.1 LCM的特点;2.3.2 LCM的仪器与操作;LCM切割原理图;LCM实例与应用广泛应用于各种肿瘤研究;;;2.5.2 有机溶剂提取;;1;沉降系数S： 颗粒在单位离心力作用下的陈啊静速度称该颗粒的沉降系数。 斯维得贝格单位（Svedberg unit）:10-13S 沉降速度： 在强大离心力作用下，单位时间内物质运动的距离。 K系数： 用来描述在一个转子中，将粒子沉降下来的效率。 ;1）差速离心法---不同粒子在离心力场沉降的差别 粗制品提取 2）速率区带离心法---粒子在梯度液中沉降系数不同 3）等密度离心法---粒子颗粒密度不同;理想梯度材料特点： 完全惰性，易分离 黏度低，渗透压低，离子强度和pH变化较小 无腐蚀作用 易纯化，成本低 浓度便于测定 物理性质、热力学性质已??? ;梯度材料的应用 ;沉淀是溶质从溶液中析出的过程。 操作简便、成本低 原理：根据不同溶质在溶剂中溶解度不同从而使其分离 通过沉淀，将目的生物大分子转入固相沉淀或留在液相。;1;3;5;2.6.3 透析;2.6.4 超滤;2.6.5 冰冻干燥;;2.7.1 固相萃取的模式及原理;2.7.2 固相萃取常用的吸附剂;2.7.3 固相萃取的装置及操作程序;2.7.4 血清、血浆中高丰度蛋白的去除;2.7.5 固相微萃取;;