12基因工程的原理跟技术75.pptVIP

第二节 基因工程的原理和技术 基因工程的原理： 基因重组 基因工程的目标： 让人们感兴趣的基因在宿主细胞中稳定和高效表达。 1）人工合成 已知其序列 已知其mRNA 的序列 已知其翻译产物的氨基酸序列 步骤2、重组DNA分子的形成： 采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的做法正确的是：( ) ①将毒素蛋白注射到棉受精卵中 ②将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中 ③将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养 ④将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵 A.①② B.②③ C .③④ D.④① 步骤5、目的基因的表达 思考： 干扰素是一种抗病毒药物，其化学本 质是蛋白质，假如现在要用大肠杆菌 来生产抗病毒干扰素，如何操作？ 1 用基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋白质。下列叙述不正确的是 A．常用相同的限制性内切酶处理的基因 和质粒 B．DNA连接酶和 RNA聚合酶是构建重组质粒必需的工具酶 C．可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒 D．导入大肠杆菌的目的基因不一定能 成功表达 6、将ada（腺苷酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是 A. 每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B. 每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点 C. 每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada D. 每个人的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子 谢谢 C * 基因工程的基本操作步骤： 1）获得目的基因； 2）形成重组DNA分子； 3）将重组DNA分子导入受体细胞； 4）筛选含有目的基因的受体细胞； 5）目的基因的表达。 步骤1：获得目的基因 目的基因：是人们所需要转移或改造的基因 如人的胰岛素基因、干扰素基因、白细胞介素基因、植物的抗病基因、抗虫基因、抗除草剂基因、种子贮藏蛋白的基因等。 获得目的基因的方法： 已知序列 未知序列 化学方法合成 利用PCR技术扩增 从基因文库获得 2）聚合酶链式反应即PCR技术 氢键断裂，形成单链DNA。 引物与DNA模板结合，形成局部双链。 在酶的作用下，不断延伸，合成双链DNA。 多次循环，获得大量双链DNA分子。 PCR技术扩增 基因文库：用重组DNA技术将某种生物细胞的总DNA或染色体DNA的所有片断随机地连接到基因载体上，然后转移到适当的宿主细胞中，通过细胞增殖而构成各个片段的无性繁殖系(克隆)，在制备的克隆数目多到可以把某种生物的全部基因都包含在内的情况下，这一组克隆的总体就被称为某种生物的基因文库。同一定义也适用于某种生物的线粒体DNA或叶绿体DNA的基因文库。 　 基因库是指某一生物群体中的全部基因。 基因克隆是只包含某些特定基因或DNA片段的克隆。 基因文库中包含着为数众多的克隆，建成后可供随时选取其中任何一个基因克隆之用。 3）从基因文库中获取目的基因： 基因文库: 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库(gene library) 基因组文库: 基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库. 部分基因文库: 基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库. 质粒 DNA分子 同种限制酶 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） GAATTCCGTAGAATTCGGATT CTTCATGAATTCCCTAA GAAGTACTTAAGGGATT CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 思考： 目的基因、运载体质粒经DNA连接酶处理，可能有几种产物？ 1、目的基因与目的基因结合； 2、质粒与质粒结合； 3、目的基因与质粒结合。 (08海南) 图为某种质粒表达载体 简图，小箭头所指分别为限制性 内切酶EcoRI、BamHI的酶切位 点，ampR为青霉素抗性基因， tctR为四环素抗性基因，P为启 动因子，T为终止子，ori为复制 原点。已知目的基因的两端分别 有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。 （1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用