12基因工程的基本操作程序(二).pptVIP

复习回顾 复习回顾 1、基因工程的基本操作程序的四个步骤是？核心是？ 2、目的基因指的是什么基因？ 3、获取目的基因常用的三种方法是？其中人工合成法又包括哪两种? 4、基因文库包括哪两类？它们有什么区别？ 5、PCR的原理是？PCR扩增过程中的解旋方式是？PCR需要的条件有？ 7、基因表达载体的构建的目的是？ 8、一个基因表达载体的组成包括哪几部分？ 9、标记基因的作用是？ 10、启动子，终止子的位置，作用？起始密码子，终止密码子呢？ （一）、检测 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 (关键步骤) ①首先取出转基因生物的基因组DNA ②用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针 ③使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明基因已插入染色体DNA中 （1）方法: DNA分子杂交 （2）过程: 知识延伸——DNA分子杂交技术 该方法是根据碱基互补配对原则，把互补的双链DNA解开，把单股的DNA小片段用同位素、荧光分子或化学发光催化剂等进行标记，之后同被检测的DNA中的同源互补序列杂交，从而检出所要查明的DNA或基因。 归纳步骤 （二）、鉴定（个体生物学水平） 2、检测目的基因是否转录出了mRNA 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 ①方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原-抗体杂交 ②过程: 用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA 归纳步骤 (四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 检测— 鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 分子杂交（注意与上不同之处） 抗原-抗体杂交 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 导入受体菌中储存 基因组文库 2基因文库的构建方法之一 （1）直接分离法(鸟枪法) 某种生物的单链mRNA 单链互补DNA 双链cDNA片段 导入受体菌中储存 与载体连接 cDNA文库 逆转录酶 DNA聚合酶 1、基因工程又称为？ 2、基因工程中用到的工具中，“分子手术刀”是？来源是？其作用是？体现了酶的什么特性？作用部位是什么键？ 3、限制酶切割之后的结果是产生？从中轴线两侧切割得到的是什么末端？从中轴线处切开呢？ 4、获得目的基因需要切几个切口？产生几个黏性末端？ 5、“分子缝合针”是？根据什么分为两大类？哪两大类？这两类酶的区别是？ 6、载体主要有哪几类？最常用的是？它的本质是？ 载体必须具备的四个条件是？ 大肠杆菌(EcoRI)的一种限制酶能识别 GAATTC序列，并在G和A之间切开。写出切开后产生的粘性末端。 原核细胞的基因结构(补充内容） 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 ①不编码蛋白质。 ：编码蛋白质 ,连续不间断 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②调控遗传信息表达,上 游有启动子，下游有终止子 真核细胞的基因结构（补充内容） 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用,上游有启动子，下游有终止子 非编码序列： 包括非编码区和内含子 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 　 目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。 一、目的基因的获取 目的基因 供体生物细胞 取出DNA 限制酶剪去多余部分 限制酶 1.目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 2、获取目的基因的常用方法 （1）从基因文库中获取 （2）利用PCR技术扩增 （3）人工合成 1.概念：基因文库 （gene library） 基因组文库 部分基因文库（如cDNA文库） 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体