凋亡抑制因子XIAP在喉癌中表达和意义.docVIP

凋亡抑制因子XIAP在喉癌中表达和意义 　　【摘要】 目的 探讨凋亡抑制蛋白XIAP在喉癌组织中的表达及其临床意义。方法 从107例喉癌患者中,随机抽取42例喉癌及癌旁组织切片作对照,应用免疫组织化学二步法测定其XIAP蛋白的表达情况。结果 在42例喉癌及癌旁组织中,XIAP表达两组间比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 凋亡抑制蛋白XIAP在喉癌的发生发展中起重要作用,但和性别、年龄和有无颈部淋巴结转移差异无相关性。 　　【关键词】 喉癌;凋亡;凋亡抑制蛋白家族;免疫组化 　　 　　多年来,在喉全切除后行放射治疗是喉癌的标准治疗。凋亡抑制蛋白家族IAPs(inhibitor of apoptosis proteins)可能作为诱导肿瘤凋亡治疗的新靶点,其中XIAP(X染色体连锁凋亡抑制蛋白,X chromosome associated IAP)是作用最强的一个[1],其在喉癌的研究甚少,本研究采用免疫组化法检测XIAP在喉癌的表达及其与临床特征的相关性。 　　1 材料与方法 　　1.1 研究对象 所有标本来自南昌大学医学院第一附属医院2007年1月至2009年12月,共查找到喉癌患者107例,均为首次入院,未进行放、化疗及免疫药物等抗肿瘤治疗措施,肿瘤标本(术前均经新生物活检并HE染色病理证实)。其中男性99例,女性8例,男女比为12.38:1;年龄最大86岁,最小37岁,平均60.7岁;≥50岁有89例,50岁有18例,随机选出42例,以减少统计误差,男性37例,女性5例,≥50岁有36例,50岁有6例。原发灶根据UICC2002年分期标准分期统计,Ⅰ～Ⅱ期36例,Ⅲ～Ⅳ期6例,有颈部淋巴结转移6例,高、中分化32例,低分化癌10例。同时取癌组手术病例手术安全切缘0.5 cm以外正常黏膜,经病理确诊无肿瘤侵犯后作为正常对照组。 　　1.2 免疫组化S P染色 　　1.2.1 标本处理及试剂 全部标本按标准取材后,经4%多聚甲醛固定,石蜡包埋、切片(厚度为5μm)。XIAP(H 202)兔抗人多克隆抗体,工作液浓度为1:300;购自美国Santa Cruze 公司;SP免疫组化染色即用试剂盒,通用型(SP 9000,Histostain TM Plus Kits,北京中杉金桥);浓缩型DAB试剂盒(DAB Kit,ZLI 9032,北京中杉金桥);苏木素 伊红染色试剂盒(C 0021,HE Staining Kit,北京博奥森生物技术有限公司); 　　1.2.2 S P免疫组化法 常规烤片68℃,2 h后脱蜡至水;3%过氧化氢孵育37℃,20 min,去除内源性过氧化物酶活性;使用柠檬酸抗原修复液,行微波热抗原修复,置室温冷却;滴加试剂A山羊血清,37℃孵育1 h,封闭非特异性抗原;滴加一抗XIAP,浓度为1:300,4℃过夜,滴加生物素标记通用二抗,37℃孵育30 min;显微镜下DAB显色,以特异显色最强,而背景基本不着色为准; 苏木素染色7 min;1%的盐酸酒精中分化;1‰的氨水中返蓝;逆梯度酒精脱水,二甲苯Ⅱ、Ⅰ各2 min,置风箱风干后中性树脂封片。 　　1.2.3 结果判定 XIAP表达阳性的肿瘤细胞胞浆及胞核中出现棕黄至棕黑色颗粒。免疫组化结果采用Frank半定量计分法判定[2]:按阳性着色程度评分:胞浆和(或)胞膜基本不着色记0分,染色棕黄记1分,染色棕色记2分,染色棕褐色记3分;按阳性细胞占比例评分,每张切片400倍镜下数100个细胞,共数4个视野,计算阳性细胞平均数:阳性细胞数≤25%记1分,26%～50%记2分,51%～75%记3分,≥76%记4分;每张切片以阳性细胞百分率和染色程度两项得分乘积作为最后得分:0～1分判为阴性( );2～3分判为弱阳性(+);4～6分判为中等阳性(++);6分以上判为强阳性(+++)。 　　1.3 统计学处理 所有数据Excel软件整理,SPSS 16.0软件分析,使用单因素χ?2检验对XIAP在癌及癌旁组织中的表达及临床病理相关性进行分析。 　　2 结果 　　2.1 XIAP在喉癌组织及癌旁对照组织中的表达 XIAP的免疫阳性产物均为棕黄色,定位主要在细胞浆,也可见于细胞核。XIAP在喉癌及癌旁组织中的表达分别为100%(42/42)、61.9%(26/42)。喉癌及癌旁组织比较,χ?2=19.76,P0.01,喉癌及癌旁组XIAP蛋白的表达差异具有统计学意义(P0.01)。 　　2.2 XIAP在不同临床特征下的表达 在42例喉癌中,XIAP的阳性表达率在临床病理分级两组间比较差异有统计学意义(P0.05)。 　　3 讨论 　　从本质上来讲癌症是一种基因病,如凋亡不足,将导致肿瘤的发生。人体内凋亡的主要执行者是一组半胱氨酸蛋白