凋亡抑制基因survivin与稽留流产发病机制相关性研究.docVIP

凋亡抑制基因survivin与稽留流产发病机制相关性研究 　　【摘要】 目的 研究凋亡抑制基因survivin?c稽留流产发病机制的相关性。方法 30例稽留流产排除胚胎染色体异常者为研究组， 正常早孕要求行人工流产患者30例为对照组。根据免疫组化结果分析survivin在稽留流产及正常早孕患者绒毛、蜕膜survivin表达情况以及两组患者细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞中survivin阳性表达情况。结果 survivin主要在细胞滋养层细胞、部分容貌间质细胞、蜕膜细胞等位置， 呈核/浆表达， 在子宫内膜腺体中也较为常见， 呈胞浆阳性状态。研究组患者绒毛survivin表达为（160.28±21.34）， 蜕膜survivin表达为（167.52±16.78）， 均显著高于对照组患者， 差异具有统计学意义（P0.05）。在细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞中， 研究组患者survivin阳性表达分别为（6.42±3.16）%和（4.93±3.68）%， 均低于对照组患者， 差异具有统计学意义（P0.05）。结论 在稽留流产发病机制中， 凋亡抑制基因survivin具有较大的相关性。 　　【关键词】 凋亡抑制基因survivin；稽留流产；发病机制；相关性研究 　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.18.035 　　稽留流产也叫做过期流产， 指的是胎儿或胚胎死亡后， 在宫内未及时排出。近年来， 稽留流产的发病几率整逐渐上升， 对孕产妇的身心健康、家庭稳定等， 都造成了不良的影响。目前， 对于稽留流产的具体发病机制尚未完全清除， 相关研究认为， 稽留流产的发病， 可能与凋亡抑制基因survivin存在一定的关系。基于此， 本文选择稽留流产排除胚胎染色体异常者30例及正常早孕要求行人工流产患者30例作为研究对象， 研究了凋亡抑制基因survivin与稽留流产发病机制的相关性问题。现报告如下。 　　1 资料与方法 　　1. 1 一般资料 选取2015年1月～2016年12月稽留流产排除胚胎染色体异常者30例作为研究组， 停经时间6～10周， 平均时间（8.6±2.2）周， 年龄20～35岁， 平均年龄（27.9±3.3）岁， 　　尿人绒毛膜促性腺激素（HCG）呈阳性， B超检查无胎心搏动， 根据妇产科学标准进行检查， 诊断患者均为稽留流产患者。选择同期正常早孕要求行人工流产患者30例作为对照组， 停经时间6～10周， 平均时间（8.3±1.9）周， 年龄21～37岁， 平均年龄（28.1±2.7）岁， 尿HCG呈阳性， B超显示有胎心搏动。两组患者一般资料比较差异无统计学意义（P0.05）， 具有可比性。 　　1. 2 方法 稽留流产患者排胎后及正常早孕者行人工流产后， 分别选取绒毛组织各分成3小份， 注意避开出血、坏死及钙化部位。1份置于4%多聚甲醛中保存固定， 待制备石蜡切片行免疫组化检查， 其余2份用以后续实验的mRNA及western blot检测。采用免疫组化法观察survivin在两组患者绒毛滋养细胞上的表达， 首先进行石蜡包埋， 常规HE染色， 石蜡切片依次二甲苯、梯度酒精脱蜡至水， 置于柠檬酸盐缓冲液中放于微波炉， 中火煮沸15 min， 待其自然冷却后， 将切片取出， 以0.1 M的磷酸盐缓冲液（PBS）洗2 min×3次[1]。加3%过氧化氢， 封闭内源性过氧化物酶， 室温10 min， 0.1 M的PBS洗 　　2 min×3次。滴加一抗小鼠抗人单克隆抗体（1：200）4℃， 过夜。室温复温40 min， 0.1 M的PBS洗2 min×3次。滴加聚合物辅助剂， 室温20 min， 0.1 M的PBS洗2 min×3次。滴加辣根酶标记羊抗兔/小鼠免疫球蛋白（Ig）G多聚体， 室温30 min， 　　0.1 M的PBS洗2 min×3次。DAB显色， 镜下控制显色时间， 自来水洗涤中止显色。苏木素复染， 以盐酸酒精分化。梯度酒精脱水、二甲苯透明， 封片[2]。采用实时荧光定量PCR检测两组患者绒毛组织内survivin mRNA的表达水平， 总RNA提取， 去基因组， RNA纯度及完整性检测， 逆转录， 30℃保温10 min， 42℃保温60 min， 72℃保温10 min。定量PCR， 应用相对定量比较CT值法（2-ΔΔCt法）分析PCR结果[3]。采用Western blot检测两组患者绒毛组织内survivin蛋白的表达水平， 绒毛组织内细胞总蛋白提取及定量， SDS胶制作， 加样电泳并转膜封闭， 然后进行孵育一抗及孵育二抗， 采用化学发光法（ECL）显影， 应用Bio-Rad Quantity One软件对蛋白条带进行定量分析[4]。 　　1. 3