梨树胶孢炭疽病生防菌筛选及其抑菌活性初步评价.PDFVIP

50 生物学通报 2017年第52卷第12期 梨树胶孢炭疽病生防菌筛选及其抑菌活性初步评价 钱鑫磊， 周珊珊： 张冬乐z 梅 侣， 刘 普2+ 230601 (1合肥一六八中学安徽合肥 2安徽农业大学园艺学院 安徽合肥 230601) 摘要 采集安徽农业大学农业园果树实习基地梨园不同组织和根际土壤样本共83份，将 分离纯化后得到的细菌、真菌和放线菌采用琼脂拮抗法，测定各微生物对梨胶孢炭疽病菌菌丝 生长的抑制作用．并选用几种常用药剂分别对病原茵菌丝和分生孢子进行处理，观测其化学抑 制效果：结果表明，菌株RT一30对梨胶孢炭疽病菌丝生长的抑制率达65．5％，明显高于80％波 尔多液可湿性粉剂400倍液．将RT一30进行形态学观察及分子学序列分析，初步将RT-30菌 株鉴定为甲基营养型芽孢杆菌BacillI．IS methylorrophicus。 关键词 胶孢炭疽病 内生菌 生物防治 中国图书分类号：O一33 文献标识码：B 梨炭疽病是严重危害梨树的一种真菌病害， 1 材料与方法 主要危害果实，较少危害叶片、枝条，严重时可导 1．1 供试梨品种 砀山酥梨，取自安徽省合肥市 致枝干枯死、早期落叶和果实腐烂…。近几年，江 高新技术农业园果树实习基地。 西、浙江、安徽、江苏、福建等南方砂梨产区因炭 gloeo— 疽病造成的早期落叶也非常严重，部分产区因早 sporioides)，由安徽农业大学果树重点实验室提供。 期落叶造成的二次开花等致使梨园完全失去产 1．3 培养基 真菌选用马铃薯葡萄糖琼脂培养 量。目前生产上应对炭疽病的防治策略主要侧重 基(PDA)、细菌选用LB培养基、放线菌选用改良 于化学药剂防治。常用的化学药剂为波尔多液、代 高氏l号培养基。 森锰锌、三唑类杀菌剂及甲氧基丙烯酸酯类杀菌 1．4菌株分离、纯化和培养 剂等∞一。但化学杀菌剂危害人类健康，农药的使用 1)一年生枝条及叶片内生真菌的分离。 量的增大，呈现出用药量与病虫害不断递加的恶 表面消毒：将实验材料用流水冲洗后，转至无 性循环。3。。因此，探求一种新型、安全的手段替代 菌工作台，表面依次用75％酒精消毒1次(20s)、 现有的化学杀菌剂尤为重要。生防菌对人畜安全、 无菌水漂洗1次。 环境兼容性好，使病原菌不易产生抗药性，可有效 病健分离：用灭菌手术刀切取病健交界处，枝 减少果品中农药残留量，正逐渐成为生产上抗病 条选择木质部，长约7—8mm，宽约2—3mm；叶片 的新兴力量一-。 选择病健交界处约边长为5mm的正方形小块，小 目前，国内、外科研人员已经分离筛选一些表 心贴置在PDA培养基上，封口后于25℃恒温培养。 型较好的生防芽孢杆菌，Arima等∞3首次发现枯 2)一年生枝条及叶片细菌的分离。将切取的 草芽孢杆菌可表现出抗病毒、抗支原体和一定程 组织依次用75％酒精、无菌水、次氯酸钠、无菌 水、无菌水浸泡3—5s后，在无菌条件下，加入适 度的抗细菌活性，Liang等哺1发现蜡状芽孢杆菌对 葡萄孢菌有较好的抑制作用，其发酵液对该菌株 量无菌水对组织进行无菌研磨后涂布于LB平板 的抑制率为75．8％。但目前尚未发现甲基营养型 培养基上，于28℃恒温培养箱中培养48h后挑取 m 芽孢杆菌在梨胶孢炭疽病上的相关