双黄连粉针剂UPLC―MS指纹图谱建立及聚类分析.docVIP

双黄连粉针剂UPLC―MS指纹图谱建立及聚类分析 　　摘要：目的 建立双黄连粉针剂的超高效液相色谱（UPLC）指纹图谱。方法 采用Acquity UPLCTM BEH C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；流动相为乙腈-0.1%甲酸，梯度洗脱，流速为0.3 mL/min，柱温40 ℃。对13批双黄连粉针剂的特征色谱图进行聚类分析，同时采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004 A）》对其质量进行评价。结果 建立了13批双黄连粉针剂的UPLC指纹图谱共有模式，特征图谱有16个共有峰，以对照品为对照，指认了3个主要色谱峰，各色谱峰有较好的分离效果。各批次间一致性良好，工艺稳定。结论 本方法快速、高效，可用于全面控制双黄连粉针剂的质量。 　　关键词：双黄连粉针剂；指纹图谱；超高效液相色谱法；聚类分析 　　中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2015）06-0091-04 　　双黄连粉针剂由金银花、黄芩、连翘3味中药经提取精制成中药注射剂，临床上加入适当溶媒供静脉注射用，现已广泛用于治疗肺炎、扁桃体炎、上呼吸道感染、急性肾盂肾炎、急性胆囊炎、小儿肠炎、婴幼儿肺炎、流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒Ⅲ型感染等多种疾病[1]。 　　中药指纹图谱对中药材和中药制剂的质量控制具有重要作用，也是中药质量标准一种重要的检测手段。中药指纹图谱技术能标示出中药材的特征图谱和共有峰图谱，从而辨别真伪，用于控制中药材的质量，评价制剂原料药材、半成品及成品质量的均一性和稳定性。超高液相色谱法（UPLC）相对于高效液相色谱法具有更好的分离效率、峰容量及灵敏度[2]，现有的对于双黄连粉针剂的质量控制方法是以黄芩苷、绿原酸和连翘苷为质量控制指标，而这种质量评价方法不够全面，因此，本试验建立双黄连粉针剂的UPLC指纹图谱，为高效控制和评价双黄连粉针剂的质量提供依据。 　　1 仪器与试药 　　美国Waters Acquity UPLCTM超高效液相色谱仪（包括在线真空脱气机、自动进样器、四元梯度泵、二极管阵列检测器和柱温箱），美国Micromass Q-TOF microTM四极杆-飞行时间质谱仪（电喷雾离子源-正、负离子扫描方法-Lockspray），MassLynx V4.1色谱工作站，KQ-5200E昆山舒美超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），JA-2003精密电子天平（上海市良平仪器厂）。 　　对照品黄芩苷（批号110715-201314，供含量测定用）、连翘苷（批号110821-201213，供含量测定用）、绿原酸（批号110753-201314，供含量测定用），购于中国食品药品检定研究院；双黄连粉针剂由哈药集团中药二厂生产，批号1409405、1409406、1409407、1409408、1409409、1409410、1409411、1409413、1409414、1409416、1409417、1409418、1409419。乙腈为色谱纯（美国Fisher公司），甲酸为色谱级（天津科密欧化学试剂有限公司），其他试剂均为色谱纯，水为屈臣氏蒸馏水。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱为Acquity UPLCTM BEH C18柱（2.1 mm×50 mm， 1.7 μm，Waters Corp，Milford USA）；流动相A为乙腈，B为0.1%甲酸水，梯度洗脱（0→3 min，5%→10%A；3→5 min，10%→12%A；5→9 min，12%→14%A；9→10 min， 14%→16%A；10→12 min，16%→19%A；12→14 min， 19%→20%A；14→16 min，20%→23%A；16→18 min， 23%→40%A；18→22 min，40%→100%A；22→23 min， 100%A）；流速：0.3 mL/min；柱温：40 ℃；进样量：3 μL。 　　2.2 质谱条件 　　电喷雾电离源（ESI），采用正离子扫描检测；碰撞能：100 V；干燥气温度：350 ℃；干燥器流速：11 L/min；雾化器压力：276 kPa；毛细管电压：4 kV；扫描方式为全扫描，质量扫描范围：m/z 100～1500。 　　2.3 对照品溶液制备 　　分别精密称取黄芩苷、连翘苷、绿原酸对照品，加50%甲醇溶液分别制成每1 mL含黄芩苷0.1 mg、连翘苷60 μg、绿原酸40 μg的混合对照品溶液。 　　2.4 供试品溶液的制备 　　从每批次随机取本品5支的内容物，混匀，取本品50 mg，精密称定，置25 mL锥形瓶中，加50%甲醇溶液20 mL，密塞后超声处理（功率250 W，频率40 kHz） 20 min，定容于