卵母细胞体外成熟培养液改良及研究.docVIP

卵母细胞体外成熟培养液改良及研究 　　[摘要] 目的 探讨卵母细胞体外成熟培养液的改良及研究。 方法 选取昆明小鼠50只作为研究对象，根据培养液的不同将50只小鼠分为A组和B组，每组各25只。A组采用低糖细胞培养基（DMEM）培养，B组采用含15%～20%胎牛血清的人类输卵管液培养，两组在相同条件下进行培养，比较两组的体外受精率、正常受精率、卵裂率、优质胚胎率、可移植胚胎率、妊娠率及活产率。 [关键词] 卵母细胞体外成熟；培养液；小鼠；体外受精 　　[中图分类号] R711.6 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）04（b）-0020-04 　　[Abstract] Objective To explore the improvement and research of the cultured medium in in-vitro maturation. Methods 50 Kunming mice were selected as the research objects， they were divided into group A and group B according to the different cultured medium， each group of 25 mice. Group A was given low sugar dulbeccos modified eagle medium （DMEM） culture， group B was given human tube fluid containing 15%-20% fetal bovine serum， two groups under the same conditions， the in-vitro fertilization rate， normal fertilization rate， cleavage rate， high quality embryo rate， portable embryo rate and pregnancy rate and live birth rates in two groups were compared. Results The in-vitro fertilization rate（71.4%）， normal fertilization rate （65.7%） and cleavage rate Conclusion The low sugar DMEM culture has good using effect， but still needs further research. 　　[Key words] In-vitro maturation； Cultured medium； Mice； In-vitro fertilization 　　随着经济的发展，近年来不孕不育症的发生率逐年增高，卵母细胞体外成熟（IVM）是一项新的辅助生殖技术[1]，是指应用少量促性腺激素或者不经过促排卵而直接从卵巢中获取体内未成熟的卵子，经过适当条件的体外培养，促使卵子成熟并具备受精能力，可以因减少刺激或无刺激而降低常规体外受精（IVF）中促排卵过程的高额费用，降低常规促排卵药物引起的卵巢过度刺激综合征等不良反应的发生率[2-3]。1991年人未成熟卵母细胞IVM技术获得首次成功[4]，此后其发展一直较为缓慢，而卵母细胞IVM技术的一项重要内容即为IVM培养液，IVM培养液是IVM技术发展的首要前提。目前临床使用的培养液大多为在常规基础培养液上加入血清等成分，目前还没有一种价廉、现成、稳定和安全的商品化的IVM培养液。本研究中将小鼠各个时期卵母细胞置入不同配方卵母细胞IVM培养液中培养并进行IVF，比较所获得的卵母成熟率、卵裂率、IVF受精率，研制一种相对稳定的改良培养液，通过对IVM培养液成分的干预，改善卵母细胞IVM的条件，为探索辅助生殖新途径及临床应用提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　昆明小鼠50只，普通级，均为健康雌鼠未孕，6～10周龄，体重20 g左右，由中国科学院遗传与发育生物学研究所实验动物中心提供，所有小鼠适应性饲养1周，给予光照14 h，暗适应10 h，自由摄食摄水。根据培养液的不同将50只小鼠分为A组和B组，每组各25只。 　　1.4 卵母细胞的体外培养 　　在37℃、5%CO2条件下培养[7]，卵母细胞成熟的标志：拆除颗粒细胞后以排出第一极体即为卵母细胞成熟的标志[8]。对体外和体内成熟卵母细胞进行常规卵胞浆内单精子注射受精。观察受精12～16 h后原核的形成情况，随后将受精卵移入GM培养基中，每8小时观察1次胚