含RGD修饰丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒质量评价.docVIP

含RGD修饰丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒质量评价 　　[摘要] 目的 探讨丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒的制备及其质量评价。 方法 采用乳化溶剂蒸发法制备丹参酮ⅡA多级纳米粒；测定丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒的粒径分布及纳米微粒表面结构；并检测丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒的载药量、包封率及体外药物释放规律。 结果 课题组制备的丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒，大小均匀，载药纳米粒的平均粒径为190nm，Zeta电位为4.3mV，包封率（94.12±5.20）%，载药量（2.05±0.12）%。与游离的丹参酮ⅡA单体相比，丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒释放速度明显减慢，在120h累积释放量为72.59%。 结论 采用乳化溶剂蒸发法成功制备了含RGD修饰的丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒。与丹参酮ⅡA单体相比，制备成纳米制剂后，多级靶向载药纳米粒能随着时间的延长将药物逐步释放出来，具有良好的缓释特征。 　　[关键词] 丹参酮ⅡA；载药纳米粒；RGD；缓释；表征 　　[中图分类号] TQ461 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）05-09-03 　　丹参酮ⅡA（Tashinone ⅡA，TSⅡA）为传统中药丹参的有效脂溶性成分，近年来研究表明TSⅡA对肝癌、胃癌等多种消化道肿瘤具有较强的细胞毒作用[1-2]，但因丹参酮ⅡA难溶于水、体内代谢快、生物利用率低等缺点，限制其在临床上的广泛应用。课题组前期研究发现丹参酮ⅡA聚乳酸载药纳米粒（TSⅡA-PLA NPs）对肝癌有较好疗效[3-5]。本研究采用乳化溶剂蒸发法，制备含RGD修饰的丹参酮ⅡA多级靶向纳米粒（TSⅡA-mPEG- 　　PLGA-PLL-cRGD NPs，TNP），利用纳米技术制备的载药纳米粒可以延长药物在体内作用时间，显著提高药物的抗肿瘤作用。本实验通过对TSⅡA多级靶向纳米粒的理化性质进行评价，优选载药纳米粒的制备工艺。 　　1 材料与仪器 　　1.1 药物和试剂 　　丹参酮ⅡA对照品（购自中国药品生物制品检定所，纯度为99.3%）；mPEG-PLGA-PLL、mPEG-PLGA-PLL-cRGD（由上海市肿瘤研究所段友容课题组提供）；吉非罗齐（购自中国药品生物制品检定所，批号：100284-199801）；Poloxamer188（购自德国BASF公司）。 　　1.2 主要实验仪器 　　高分辨透射电镜（HIATCHIH-7000，日本日立电子公司）；激光粒度散射仪（Nicomp 380/ZLS，美国）；紫外分光光度计（德国Eppendorf公司）；微量电子分析天平（Sartotius CP225D）；低温高速离心机（Centrifuge 5804R，德国Eppendorf公司）；质谱仪（API 3000，美国ABI公司）。 　　2 实验方法 　　2.1 TNP形态及粒径分布 　　取实验制得的TSⅡA多级靶向纳米粒，加入纯水稀释至适宜浓度，Nicomp 380/ZLS激光粒度分析仪测定TNP的粒径。HIATCHIH-7000高分辨透射电镜考察纳米粒的形态。 　　2.2 测定TNP包封率及载药量 　　由于丹参酮为强脂溶性药物，因此未包封的药物在水溶液中大部分是以沉淀的形式存在，因此在测定包封率和载药量前，先低速离心（8000×5min）除去丹参酮沉淀。选用低温高速离心（离心条件：温度为-4℃，转速为17500×g，离心时间为30min）分离纳米粒和水溶液，取上清液测定丹参酮含量，沉淀洗涤离心两次，干燥称重得纳米粒重量。用HPLC来测定丹参酮沉淀和清液中丹参酮药物的含量。按下列公式计算包封率及载药量。 　　包封率=（W药-W游）/ W药×100% 　　载药量=（W药-W游）/ W纳米粒×100% 　　W药：TSⅡA总药量（mg），W游：游离TSⅡA药量（mg），W纳米粒：载药纳米粒的总重量（mg）。 　　2.3 TNP体外药物释放 　　实验采用透析法检测TNP体外药物释放率。主要步骤：精确称取TSⅡA（1mL）、TSⅡA-mPEG-PLGA-PLL（1mL）和TSⅡA-mPEG-PLGA-PLL-cRGD （1mL）各3份，之后每分分别加入PBS（2mL，pH 7.4），混匀后放入透析袋中，扎紧使其悬浮于具塞锥形瓶中，在锥形瓶中再次加入49mL 0.5% SDS生理盐水，然后将其置于恒温水浴振荡器中持续振荡（150次/min，37℃）。分别于0.5、1.5、2.5、7.5、12、18、24、48、72、96和120h取样，每次500μL，随后立即补入温度为37℃的0.5% SDS生理盐水溶液500μL。样品经HPLC测试，计算丹参酮ⅡA的浓度和累积药物释放百分比，以累积释放药物的百分率（%）对时间（hours）作图，绘制释药曲线。 　　3