在不同饲料中添加加热灭活植物乳酸杆菌P―8对大菱鲆幼鱼抗氧化能力和血清生化指标影响.docVIP

在不同饲料中添加加热灭活植物乳酸杆菌P―8对大菱鲆幼鱼抗氧化能力和血清生化指标影响 　　摘要：将植物乳酸菌P-8以灭活的形式添加到大菱鲆幼鱼的两种基础饲料中，旨在研究灭活植物乳酸杆菌（HK-LP）对大菱鲆饲料中豆粕替代鱼粉的影响。试验结束时取血测定血清超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）、碱性磷酸酶（ALP）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）活力和总蛋白（TP）、胆固醇（TCHO）、甘油三酯（TGK）含量。结果显示，D因素和P因素在AST、ALP、TGK和SOD有显著交互作用（P0.05），CAT呈上升趋势，但未达到显著水平（P0.05）。由此得知，在豆粕替代45%鱼粉蛋白饲料中添加一定浓度的灭活乳酸杆菌P-8对大菱鲆幼鱼血清生化指标和抗氧化能力有显著性影响。 　　关键词：灭活植物乳酸杆菌P-8；大菱鲆；豆粕；抗氧化能力；血清生化指标 　　大菱鲆是原产于欧洲的一种天然良种，因其对生态环境的超强适应能力、快速的生长速度以及优良的品质，成为各国竞相引种的对象。自从20世纪末我国水产科学家雷霁霖院士从英国引进以来，大菱鲆产业迅速发展并产生巨大的经济和社会效益，中国目前已经成为世界大菱鲆人工养殖大国。然而近些年来随着人们对水产动物需求量的不断攀升，鱼粉却出现产量下降价格飙升，鱼粉短缺已成为一个全球性问题。因此水产饲料中植物饲料的使用受到高度的关注。豆粕由于其蛋白含量高、氨基酸相对平衡、价格合理[1]而成为重要的鱼粉替代蛋白源。但是，豆粕中的胰蛋白酶抑制因子和血球凝集素等抗营养因子以及氨基酸的不平衡性和可利用性限制其在鱼类饲料中的用量。研究表明，全脂大豆或浸提豆粕会抑制生长，降低饲料效率[2]。豆粕中的抗营养因子会损伤肠道[3]，影响肠道内的微生态环境[4]，抑制消化酶的活性[5]，影响营养物质的消化吸收。某些含抗营养素的植物源饲料原料可引发急性中毒症状；但在正常饲喂条件下，通常只有长期摄食某种特定植物才会产生轻微的负面效应。这类效应包括干扰消化过程及生长、降低饲料效率、胰腺肥大症、低血糖、肝功能障碍、异性生殖和免疫抑制。能否在低鱼粉含量条件下寻找到一种促进生长的安全有效的添加剂显得尤为重要。 　　最近饲料添加剂越来越多地用作鱼类免疫刺激剂[6]，在这些添加剂里使用最广泛和效果最显著的就是益生菌。对益生菌的定义包括活的或者死的微生物细胞代谢产物，能够调节动物肠道菌群和刺激免疫酶活，不一定是活菌，只要能对宿主产生益生作用[7]。有益生功能的细菌无论是以活菌形式添加[8-9]还是以灭活菌的形式添加[10-14]都显示出积极的促健康性能。加热灭活的植物乳酸杆菌（HK-LP）赋予了乳酸菌新的性能。乳酸菌是不耐高温高压的，但是HK-LP能够抵抗饲料制粒过程中的高温高压，最近五年内这种新性能在农场动物饲料中得到广泛应用[15-16]。由于口服活的益生菌可能会将活的细菌引进到开放水环境中，又引发人们对水产业新的担忧。在这种担忧下，灭活菌因为不会与其他的水生生物相互作用而不存在安全隐患，替代活菌制剂在水产养殖上崭露头角[12]。灭活菌和活菌在免疫反应方面的许多对比研究结果显示加热灭活的酪酸菌在?|鱼身上有明显的免疫调节性能[17]；加热灭活的创伤弧菌疫苗比福尔马林灭活的疫苗在牙鲆身上能更好地引起免疫应答[18]；加热灭活的小肠结肠炎耶尔森氏菌能够保持小鼠免疫调节性能[19]。HK-LP用作小白鼠免疫刺激剂诱导小鼠产生白介素12和抗癌抗菌素，增加伽马干扰素的生成，进而抑制病毒繁殖和其他的T细胞并活化启动巨噬细胞吞噬作用[20]；日粮中添加HK-LP能够提高健康成年人[21]和肉鸡[16]的免疫力。 　　肉食性鱼类不适应消化含高植物蛋白的饲料，其饲料中添加豆粕易引发其肠道炎症。肠粘膜作为鱼类免疫系统的第一道非特异性免疫屏障，受到损害后，致病菌会侵入机体。普遍认为肠道有益菌群和肠道上皮细胞间的相互作用在动物肠道粘膜免疫方面起了重要作用。乳酸菌通过生物拮抗作用改善试验动物肠道微生态环境，增强肠道上皮细胞的屏障层，调节肠道菌群平衡，抑制有害菌的感染和肠内腐败。本试验希望通过灭活植物乳酸杆菌的益生功能削弱豆粕带来的消极作用，调节大菱鲆肠道健康，改善其营养状况，促进大菱鲆幼鱼生长，提高大菱鲆幼鱼的免疫力，从而提高大菱鲆对豆粕这种植物蛋白源的耐受力，提高植物蛋白在肉食性鱼类饲料中的替代比。 　　1材料和方法 　　1.1饲料制作 　　植物乳酸菌菌种由内蒙古农业大学食品科学与工程实验室提供，菌种以冻干形式保存的，MRS肉汤培养基37 ℃培养24 h活化，80%甘油保存在-80 ℃冰箱中作为菌种保存备用。MRS琼脂培养基划线培养48 h，挑取单菌落，接种于MRS肉汤培养基24 h，16 500 g离心10 min，PB