四氨基酞菁锌负载二氧化硅纳米粒子合成及其对细胞毒性研究.docVIP

四氨基酞菁锌负载二氧化硅纳米粒子合成及其对细胞毒性研究 　　摘 要 通过在无极核微乳液中水解乙烯基三乙氧基硅烷（TEVS）和3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES），制备了疏水性光敏剂-2,9,16,23-四氨基酞菁锌负载的表面带有正电荷的二氧化硅纳米粒子（SiO2@ZnPc（NH2）4）。通过透射电镜（TEM）、Zetasizer Nano-ZS粒度仪（DLS）、紫外-可见分光光度计（UV-Vis）研究和表征了该纳米粒子的表面形貌、表面电荷、水溶性和稳定性。所合成的纳米粒子粒径约20 nm，颗粒为规则的球形，粒径较均一, 具有很好的分散性，平均ζ电位值为（28.8±2.79 mV），在714 nm处有强吸收峰。此外，负载在纳米粒子中的ZnPc（NH2）4不易泄漏，增强了ZnPc（NH2）4的抗光漂白能力。以1,3-二苯基异苯并呋喃（DPBF）为探针分子，检测出SiO2@ZnPc（NH2）4可以有效产生单线态氧。通过测量纳米粒子与活细胞（HeLa, U251, PC-12）孵育后的细胞活度来检测对细胞的毒性，结果显示，纳米粒子浓度≤300 mg/L时，未掺杂ZnPc（NH2）4的二氧化硅纳米粒子（SiO2-NH2）对细胞没有毒性；当其负载ZnPc（NH2）4后，对细胞没有显著毒性。 　　关键词 二氧化硅纳米粒子； 四氨基酞菁锌； 微乳液； 细胞毒性 　　 　　1 引 言 　　近年来，光动力治疗（PDT）作为一种治疗癌症和黄斑变性等疾病的新兴疗法而备受关注[1,2]。PDT是通过特定波长的光照射肿瘤组织，使富集于肿瘤组织中的光敏剂被激发，激发态光敏剂将能量传递给周围的氧，生成活性很强的单线态氧，单线态氧与细胞内的生物大分子（脂肪、核酸、氨基酸等）发生氧化反应，产生细胞毒性作用，进而使致病细胞坏死或凋亡[3]。而且，PDT在杀伤肿瘤细胞的同时对正常组织损害很小，从而通过控制光照辐射范围，可实现对致病组织高效、有选择性地治疗。因此，光敏剂的研究在PDT的疗效中显得尤为重要。第二代光敏剂酞菁因其具有在红外可见光区有强吸收，在非光照条件下毒性低，且产生单态氧效率高等优点，在PDT中有良好的应用前景[4,5]。然而，大部分光敏剂（如四氨基酞菁锌（ZnPc（NH2）4），酞菁硅（IV）（Pc4）等）在生理条件下几乎不溶于水，并且易形成聚集体，使其光动力活性显著降低，从而，限制了其在临床中的应用[6]。 　　由于二氧化硅纳米粒子具有均一小孔、大的比表面积、良好的水溶性和生物相容性等优点[7,8]，所以可作为药物和基因的运载体，在生物领域具有良好的应用前景。然而，二氧化硅纳米粒子对活细胞或生物体是否有毒性，结论尚不明确[9]。通常认为二氧化硅纳米粒子的生物毒性与其表面配体、粒径和在溶液中的溶解度有关[10]。二氧化硅纳米粒子的粒径越小，在体内循环阻碍越小，容易穿透细胞膜到细胞组织中，更适合在生物体内应用[11]。本研究利用可逆微乳液法，将ZnPc（NH2）4负载到二氧化硅纳米粒子中，然后共价修饰氨基，制备了粒径约20 nm的带有正电荷的二氧化硅纳米粒子（SiO2@ZnPc（NH2）4）；同时，制备了未掺杂ZnPc（NH2）4的二氧化硅纳米粒子（SiO2-NH2）。利用透射电镜（TEM）、Zetasizer Nano-ZS粒度仪（DLS）和紫外-可见分光光度计（UV-Vis）对其进行表征，并且考察了它的稳定性和产生单线态氧的能力。然后，研究了纳米粒子对不同细胞（HeLa, U251, PC-12）的毒性。本研究为二氧化硅纳米粒子在生物领域的应用提供了实验基础。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　Hitachi H-600透射电子显微镜（日本Hitachi公司）；Zetasizer Nano-ZS粒度仪（英国Malvern公司）；Mini-1240紫外-可见分光光度计（日本Shimadzu公司）；XS2酶标仪（美国BioTek公司）；5415R高速离心机（德国Eppendorf公司）；简易太阳光模拟光源（长春博盛量子科技）。 　　乙烯基三乙氧基硅烷（TEVS，97%）和1,3-二苯基异苯并呋喃（DPBF，97%）购自Aldrich公司；3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES，98%，Fluka公司）；3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基溴化四氮唑（MTT，Sigma公司）； 2,9,16,23-四氨基酞菁锌（ZnPc（NH2）4，黑龙江大学提供）；重水（英国Cambridge Isotope Lab）； 培养基（DMEM）和胎牛血清（FBS）（美国Gibco公司）；Tween-80、正丁醇、氨水（25%）和二甲基甲酰胺（DMF）和其它试剂均为国产分析纯试剂；实验用水为超纯水（18.2 MΩ#8226;cm）。