土壤中高效解磷菌鉴定及其对皖南烤烟幼苗生长影响.docVIP

土壤中高效解磷菌鉴定及其对皖南烤烟幼苗生长影响 　　摘要 从皖南地区200多个土壤样品中分离、筛选出4株能降解无机磷的优势菌株GY22-3-2、GY7-3-7、GY13-2-5、GY2-4-2，并通过实验室培养测定其解磷能力，分别为11.92 %、8.25%、7.48%、3.49%。将其接种于烤烟幼苗，考察其对烤烟幼苗生长的影响。结果表明，在充分供应烤烟幼苗氮、钾等其他营养元素的情况下，解磷菌株能够不同程度地发挥解磷效果，在其影响下，烟株各部位鲜重、干重及叶绿素含量较不接菌的对照显著增加，根系活力较对照明显增强，其中，GY22-3-2菌株较其他菌株表现出更强的解磷能力，解磷效果较好。 　　关键词 烤烟；解磷菌；解磷能力；鉴定；幼苗生长 　　中图分类号 S572 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）16-0029-02 　　磷是高等植物生长所必需的大量矿质元素之一，然而土壤中95%以上的磷呈有机（含量约占全磷含量的50%以上）或无机磷化物状态存在，水溶性很低，很难被植物直接吸收利用，只有很少比例的速效态磷能被植物直接利用，从而造成了世界范围内磷素的缺乏。解决这一问题有2条途径：一是增加磷源投入，二是提高难溶性磷的利用率。从农业可持续发展来看，增加磷源投入存在一定的问题，而提高难溶性磷的利用率的潜力则很大，它是对土壤中磷及所施入的磷肥进行活化提高其有效性，走低投入高产出的可持续发展道路。本试验从安徽省皖南地区采集的土样中分离筛选出了4株能降解无机磷的微生物，并进一步纯化鉴定，初步测定了它们的解磷能力，并将其接种于烤烟幼苗，观察测定其对烤烟幼苗生长的促进作用，最终确定具有较高解磷能力的菌株，为进一步研究土壤微生物解磷机制及开发解磷菌株制剂奠定坚实的基础[1-3]。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验土概况 　　本试验分离解磷微生物用土采集自安徽省皖南地区的200多个土样；盆栽试验用土来自黄山市徽州区东山村，主要理化性状：pH值6.2～6.7、全氮0.15 g/kg、全磷0.32 g/kg、全钾19.7 g/kg、细菌2.1×106个/g土、放线菌3.5×106个/g土、真菌1×106个/g土、碱解氮24.5 mg/kg、速效磷1.9 mg/kg、速效钾98 mg/kg。 　　1.2 供试材料 　　供试烤烟品种为云烟97。供试培养基为分离培养基：解磷菌株分离培养基（液体）（以下简记为P1培养基）配方如下：葡萄糖10 g，硫酸铵0.5 g，磷酸钙10 g，氯化钠0.3 g，氯化钾0.3 g，硫酸镁0.3 g，硫酸亚铁0.03 g，硫酸锰0.03 g，蒸馏水1 000 mL，pH值7.0～7.5，121 ℃灭菌30 min，pH值为6.8～7.3。解磷菌株分离培养基（固体）：琼脂18～20 g，其他同液体培养基。斜面培养基成分与固体培养基相同。 　　1.3 菌株分离方法 　　涂布法：取野外采集土样适量，研钵研细，称取10 g粉末加入盛有100 mL无菌水的三角瓶中，25 ℃?u床恒温振荡30 min，取上清液作10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8稀释液，各取0.2 mL该稀释液涂布于平板培养基上，每个浓度重复3皿，28 ℃恒温培养7 d。挑取单菌落转至斜面培养至菌苔长起，置4 ℃冰箱保存，进一步筛选，共得224个菌株。 　　1.4 解磷能力的测定方法 　　1.4.1 菌株在固体培养基中解磷能力的测定。观察溶钙圈法：将初筛得到的224个菌株接种于无机磷固体培养基中，倒置于28 ℃恒温箱中培养7 d，观察有无溶钙圈，并根据溶钙圈的大小初步确定解磷效果。 　　1.4.2 菌株在液体培养基中解磷能力的测定。钼酸铵定磷试剂比色法：将初筛得到的4个菌株GY22-3-2、GY7-3-7、GY13-2-5、GY2-4-2分别接种在灭过菌的P1液体培养基中，用不接菌的液体培养基作对照，28 ℃往复摇床144 r/min培养7 d。取过滤后的培养液测定培养液中可溶性磷的含量。 　　1.5 解磷菌株对烟草幼苗生长的促进作用试验设计 　　采用盆栽法进行研究。试验地点：皖南烟叶公司黄山烟叶经理部试验基地；花盆规格12 cm×12 cm；栽培环境：温室中；烟苗苗龄30 d。每株烟基施K2SO4 4 g、NH4NO3 2.5 g、缓苗后追施K2SO4 2 g、NH4NO3 1.5 g。 　　本试验共设5个处理，分别是GY22-3-2、GY7-3-7、GY13-2-5、GY2-4-2、不接菌作对照（CK），3次重复。在烟苗移栽后第4天（基本缓苗）接种28 ℃ 144 r/min摇床培养7 d的菌株培养液和不接菌的培养液CK，每株20 mL。 　　接种后每10 d测1次株