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（Real Time PCR） Real Time PCR 基础知识 Real Time PCR 实验方法 Real Time PCR 解析方法 Real Time PCR 应用实例 Real Time PCR扩增过程中，每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 ( C-代表Cycle，t-代表threshold） SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。 TaqMan探针为一寡核苷酸， 5’端标记一个报告基团(Reporter)， 3’端标记一个淬灭基团(Quencher)。 Cycling probe为一寡核苷酸，5’端标记一个荧光报告基团(Reporter)，3’端标记一个荧光淬灭基团(Quencher)，寡核苷酸为DNA/RNA杂合体。 SYBR Green I 法 ◆优点：价格便宜、使用方便、无需合成特异性探针。 ◆缺点：引物要求高（要求特异性扩增）、不能进行多重PCR。 Probe法 ◆优点：特异性强，能进行多重PCR。 ◆缺点：需要设计特异性探针，成本高、有时设计困难。 各公司Real Time PCR检测系统比较 Real Time RT-PCR反应 反转录反应 标准曲线分析 融解曲线分析 绝对定量和相对定量解析方法