基因工程专题1-5（完整）.pptVIP

* 4.目的基因的检测与鉴定：目的基因在受体细胞中是否稳定存在，是否表达? （1）分子水平的鉴定： ①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入目的基因-----目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键；检测方法？ ②检测目的基因是否转录出了mRNA 检测方法？ ③检测目的基因是否翻译出了蛋白质 检测方法？ （2）个体生物学水平的鉴定 方法？ 核酸探针：核酸探针是指带有放射性同位素(如32P)、荧光分子等标记的特定已知序列的核酸片段，它能和与其互补的核酸序列杂交，形成双链，所以可用于待测核酸样品中特定基因序列的检测。包括DNA探针和RNA探针。 核酸探针具有特异性，高度的敏感性。 核酸分子杂交：互补的核苷酸序列通过碱基配对形成稳定的杂合双链分子的过程称为核酸分子杂交。 完 把某一生物体内全部已知基因分别点到DNA微列阵或者基因芯片上，再用不同发育阶段的cDNA与之杂交，就能了解某些基因对特定生长发育阶段的表达情况。 (1)斑点印迹(Dot-blot)　将待测核酸样品变性后直接点样在膜上，称之为斑点印迹。为使核酸牢固结合在膜上，通常还将点样后的膜进行80℃真空烘烤2h。  (2)Southern印迹(Southern blot)　这是指将DNA片段经琼脂糖凝胶电泳分离后转移到固相支持物上的过程。  (3) Northern印迹(Northern blot)　Northern印迹是指将RNA片段变性及电泳分离后，转移到固相支持物上的过程。 杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方法被检测的核酸可以是提纯的，也可以在细胞内杂交, 即细胞原位杂交。探针必须经过标记，以便示踪和检测。使用最普遍的探针标记物是同位素, 但由于同位素的安全性，近年来发展了许多非同位素标记探针的方法,例如，使用荧光分子。 *