柑橘组织细胞的激光显微切割-Bio-protocol.PDFVIP

/e1010197 DOI:10.21769/BioProtoc.1010197 柑橘组织细胞的激光显微切割 Laser Microdissection of Citrus Tissue Sample 姜楠，郭文武* 园艺植物生物学教育部重点实验室，园艺林学学院，华中农业大学，武汉 *通讯作者邮箱：guoww@ 引用格式：姜楠，郭文武. (2018). 柑橘组织细胞的激光显微切割. Bio-101 e1010197. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010197. How to cite: Jiang, N. and Guo, W. W. (2018). Laser microdissection of citrus tissue sample. Bi o- 101 e1010197. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010197. (in Chinese) 实验原理及目的：通过激光显微切割系统，精细切割收集目标样品，进一步进行特定柑 橘组织细胞样品的遗传信息或基因表达分析，突破了传统的取样技术限制，更为精细准 确的分析特定组织细胞内分子活动。 关键词：激光显微切割，组织细胞，精细准确 材料与试剂 1. 将切片粘片到显微切割专用膜玻片上 (例：Leica 显微切割载玻 PEN 膜，catalog number: 2. 切割玻片 (Leica 显微切割系统配套膜玻片耗材，例：Leica 显微切割载玻PEN 膜， catalog number: 3. 收集管 (Axygen 0.5ml 薄壁PCR 管) 仪器设备 1. 激光显微切割仪 (Leica, model: LMD 7000) 实验步骤 1. 开启Leica LMD 7000 系统 首先打开显微镜控制箱，绿灯亮起，显微镜面板亮起进入操作界面。然后打开激光 模块，先将控制箱前面安全锁打开，再依次打开控制箱后面激光电源，该模块的预 Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 1 /e1010197 DOI:10.21769/BioProtoc.1010197 热时间为5-10 min，当左右指示灯同时显示绿色时完成预热，可以正常使用。该系 统在开机后会进行自检，等自检结束后打开计算机上的软件LMD V7.5.1。 注： 1) 不要反复启动激光模块，否则会影响使用寿命。 2) 使用过程中若长时间不使用激光器，其会自动回到非激活状态，当再次使用时 激光器就会自动激活，不需要开机时的预热过程。 2. 激光显微切割样品上机 2.1 将已经制备好的玻片样品面朝下固定在显微切割系统配套的样品板上，常用样 品板上最多可以同时容纳3 张载玻片，细微的偏离就会造成很大偏差，所以 必须保证玻片放置准确。点击软件工具栏中“ ”将样品板平推进显微镜载物 台卡槽内，确认样品板已经固定牢靠，可进行下一步操作。 2.2 将收集管安装在收集架上，常用收集架最多可以放4 个0.5 ml 收集管，安装 时移动收集管管帽至收集架的末尾处，直至卡到不能移动位置，收集管尾部向 回折卡到收集器里，否则会导致部分收集样品丢失，点击“ ”，将收集器放 入卡槽内。 Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 2 /e1010197 DOI:10.21769/BioProtoc.1010197 注： 1) 样品板放入样品载物台时要确定样品板已经固定牢稳，方可进行切割。 2) 收集器放入卡槽时要确