组织培养的技术2.docVIP

六、试述体细胞胚胎发生的实际应用。 （1）无性繁殖 （2）人工（合成）种子的制备 （3）分离可再生的原生质体的材料 （4）遗传转化 （5）代谢产物的合成 （6）遗传资源的保存 单细胞培养方法有平板培养法、看护培养法、微室培养法和条件培养基培养法。 五、试述细胞培养的应用。 1突变体选择 2植物次生代谢产物的生产（细胞的工厂化生产、高产细胞系的建立、“种子”培养、细胞的大量培养） 3生产天然的植物成分 4生物转化 5细胞固定化 二、简述花药培养的一般程序。 （1）取材：一般而言，单核后期花药对培养反应较好。 （2）预处理： 适当的预处理可以显著提高花药的愈伤组织诱导率。常用的预处理方法是低温冷藏，具体的处理温度和时间长度因物种而异：烟草7～9℃，7～14 d；水稻7～10℃，10～15 d；黑麦1～3℃，7～14 d；大麦3～7℃，7～14 d。但低温预处理对小麦效果不稳定，有时还有负效果。 （3）消毒：通常只要以70％酒精喷洒或擦拭花器或包被着麦穗的叶鞘表面，即可达到灭菌要求。 （4）接种（5）培养方式和培养条件：培养方式：花药的培养方式主要有3种：一是在琼脂固化培养基表面培养，二是在加入30％Ficoll(水溶性聚蔗糖)的液体培养基表面飘浮培养，三是利用固体一液体双层培养基培养，以便既能保持较高的接种密度，培养基又不易失水干涸。 培养条件：主要包括温度和光照。（ 6）花粉植株的诱导 三、简述花粉分离与纯化的方法及花粉培养的方式。 将小孢子从花药里游离出来的主要方法有 （1）自然散落法 （2）挤压法（①直接挤压法、②研磨过滤收集法） （3）机械游离法（①磁搅拌法、②小型搅拌(超速旋切)法） 纯化方法：过筛、离心收集、使用聚果糖等制成不连续梯度等方法。 花粉培养方式：平板培养、液体培养、双层培养、看护培养、微室培养、条件培养基培养 四、影响雄核发育的因素有哪些？ 1）基因型：植物基因型是影响花药离体培养诱导单倍体成功的最重要的因素之一。迄今为止，花药培养的成功主要局限于3个科的植物—茄科、禾本科和十字花科。 2）植株生理状态和生长条件：供体植株的年龄及其所处的生长条件(如光周期、光强、温度和矿质营养)也能影响花药对离体培养的反应。一般来说，幼年植株的花药反应能力较好。在开花末季采集的花药不但形成孢子体的频率很低，而且发生反应的时间也较迟。 3）花粉发育时期：花粉发育时期的选择对雄核发育也是至关重要的。一般而言单核后期花药对培养反应较好，但不同物种最适的发育时期不同。 4）预处理：接种前或后对花药采用适当的方法进行预处理，能使绿苗产量大量增加。在花药培养中采用的预处理方法很多，有高低温、化学物质、离心、射线等方法。 5）培养基 6）药壁因子 7）培养条件：培养条件如温度、光照、板植密度等对雄核发育也有一定的影响。 五、试述单倍体植株的鉴定方法及其染色体加倍的方法。 1）花粉和花药植株的倍性鉴定：染色体直接计数法、间接鉴定（扫描细胞光度仪鉴定、细胞形态学鉴定法、植株形态学鉴定法、高／低温胁迫法 、杂交鉴定法分为自交鉴定和测交鉴定、分子标记鉴定分为①生化标记鉴定②分子标记研究） 2）花粉和花药植株的染色体加倍 茎段培养：单倍体愈伤组织培养过程中会有一定频率的核内有丝分裂(没有核分裂的染色体复制)及花粉核的融合，形成二倍体细胞，可有意识地利用这一特点来获得纯合的二倍体植株。 化学试剂诱变:单倍体植物染色体加倍用得最多的是化学诱变法，常用的诱变剂有秋水仙素和Oryzalin(黄草消)、trifluralin(氟乐灵,一种除莠剂)、APM(amiprophos methyl)等除草剂，其中秋水仙素应用最广泛。 二、简述离体授粉的程序。 ①确定开花、花药开裂、授粉、花粉管进入胚珠和受精的时间；②去雄后将花蕾套袋隔离；③制备无菌子房或胚珠；④制备无菌花粉；⑤胚珠(或子房)的试管内授粉。 三、什么是胚珠培养和子房培养？简述胚珠培养和子房培养的技术措 概念:①胚珠培养:是将胚珠从母株上分离出来，在人工控制的条件下，进行离体培养，使其生长发育形成幼苗的技术。根据培养目的的不同，可将胚珠培养分为受精胚珠培养和未受精胚珠培养。②子房培养:是指将子房从母体上分离下来，置于培养基上，使其进一步发育成幼苗的技术。根据培养的子房是否授粉，可将子房培养分为授粉子房培养和未授粉子房培养。 技术措施: ①胚珠培养:（1）材料的选择和灭菌.（2）培养基:多为White、Nitsch、MS等，Nitsch使用更普遍。离体胚珠发育中，培养基的渗透压起着重要的作用，特别是对幼嫩的胚珠。不同发育时期的胚珠对培养基的要求也不同。（3）胎座和子房对胚珠培养的影响: 胎座或子房的某些组织在胚珠发育初期起着重要的作用。（4）胚发育时期的影响: 合子和早期原胚期的胚珠较难剖取和培养，对培