杨树地植物组织培养.pptxVIP

杨树组织培养;一、杨树组织和器官培养;2 . 外植体灭菌 从健壮母株上选取适宜外植体，洗衣粉液漂洗，毛刷刷净枝条和腋芽处的污物和附着物，流动自来水充分冲洗干净，移入超净工作台。杨树外植体常用消毒方法有两种：第一种是次氯酸钠灭菌法，另一种是氯化汞灭菌法。消毒后用无菌滤纸吸干多余水分，将材料适当分割后接种。通常将嫩枝剪成带顶芽或1个腋芽的1~2cm茎段;以芽为外植体时要剥除鳞片，以叶片为外植体时可剪成0.5~1.0cm2 的碎片。;3 . 培养基和培养条件 MS和WPM培养基较为常用。1/4MS和1/2MS培养基在诱导试管苗生根时常用。还有一种大量元素减半的1/2MS培养基，主要用于芽的诱导。常用生长素有NAA、IBA和2,4-D。 NAA和IBA广泛用于杨树生根，并与细胞分裂素相互促进芽增殖。2,4-D对杨树愈伤组织诱导有效，对器官分化不利。常用细胞分裂素有KT，6-BA,ZT和2ip等。6-BA在杨树芽的诱导中应用最广。碳水化合物通常使用蔗糖，用量为2~3g/L。光照以16h/d居多，光照强度影响某些杨树的形态发生，有时弱光或全黑会促进愈伤组织分化和根的再生。培养温度通常为25 ℃，适当的昼夜温差有利于试管苗生根和根系生长。 ;4 . 成苗途径 杨树的成苗途径有： ① 直接诱导单芽苗或丛生芽； ②直接诱导不定芽； ③诱导产生愈伤组织。;5 . 生根与移栽 杨树不同种类生根的难易程度有极大差异。生根用基本的培养基多为1/2MS培养基，生长调节剂多用IBA或IAA、NAA。细胞分裂素对根的生成有抑制作用，但若将分化培养基中诱导出的不定芽直接转入生根培养基中，可能由于细胞分裂素不足，导致芽苗发黄枯死，宜采用逐步降低细胞分裂素的过渡培养法。移栽时把有根的完整植株取出，洗去根部附着的培养基，覆盖并保持一定的湿度与光照，一段时间后移入温室，最后定植在造林地。;（二）杨树胚胎培养 1 . 培养程序 取不同发育时期的蒴果经表面消毒后，在无菌超净工作台上解剖，剥离幼胚或胚珠接种于培养基上，使胚在体外继续发育，最终萌发成苗。 2 . 影响因素 胚培养时期是影响离体胚培养成功的关键因素。;（三）杨树花药和花粉培养 1 . 培养程序 冬末早春时期??从生长健壮的雄株上采取花枝，室内水培催芽，待花芽膨大后，摘下花芽，剥掉芽鳞和苞片，浸入10%次氯酸钠溶液中消毒10min，无菌水冲洗，在超净工作台上剥离花药，接种于培养基上，25~27℃黑暗下培养，诱导愈伤组织。待愈伤组织长到直径3mm时，转移到分化培养基上，23℃/16℃昼夜温差8~9h/d光照，诱导愈伤组织再分化成苗。;2 . 影响因素 花药离体接种后，诱导形成的愈伤组织在时间和质地上有较大差异。接种20d后出现的紧密型愈伤组织大多为花粉愈伤组织；越接近自然花期（五月份）采枝，且取花粉处于单核靠边期的花药离体培养，花药愈伤组织诱导率越高，适当预处理（如低温），可明显提高花药愈伤组织诱导。培养基及其附加物也影响花粉愈伤组织的诱导和分化。;二、杨树原生质体培养;三、杨树遗传转化