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活血祛瘀胶囊微生物限度检查方法验证 　　【摘 要】目的：建立活血祛瘀胶囊微生物限度检查方法。方法：采用供试品制备方法，对控制菌计数及检查方法进行验证。结果：进行微生物限度的细菌检查结果显示；试验组各菌株及稀释剂对照组回收率大于70%。结论：通过方法学验证实验，采用革兰阳性菌、革兰阴性菌及真菌对计数方法进行筛选，能有效地消除或减弱药品中抑菌成分的影响，从而使检测结果更接近实际，促进提高药品内在的质量，保证人民群众用药安全、有效。 　　【关键词】活血祛瘀胶囊；微生物；限度检查；培养基；稀释液；菌种 　　药品微生物限度是药品安全性的重要指标之一。随着药品剂型的日益发展和药品标准的不断提高，及时有效地进行药品微生物限度检查是摆在药检工作人员面前的重大课题。药品微生物限度检查方法为1995年版《中国药典》首次收载，并在2005年版《中国药典》增订了方法验证试验[1]。活血化瘀胶囊由三七、炮山甲、血竭、当归、红花、香附等二十四味药制成。有活血化瘀，行气止痛之功效。用于血瘀气滞，肿痛并见。一切跌打损伤的早期治疗，临床应用疗效显著。由于中成药成分复杂、有的还具有一定的抑菌性， 因此， 有必要建立微生物限度检查方法，用于测定制剂中的微生物感染程度， 以保用药的有效性和安全性。实验结果表明， 该方法简便， 结果准确， 可用于活血祛瘀胶囊的微生物限度检查。 　　1 实验材料 　　1.1实验样品 　　祛瘀胶囊 ：（规格为0.45g×36#； 批号：130405）。生产单位为湘潭县中医院制剂室。器具采用无菌培养皿（直径90mm），无菌移液管（1ml、10ml）等。 　　1.2 培养基 　　本次微生物限度检查的五种培养基：营养肉汤培养基（批号200708219）、营养琼脂培养基（批号200705126）、改良马丁培养基（批号200708224）、玫瑰红钠琼脂培养基（批号200709289）、胆盐乳糖培养基（批号200709249）、该五种培养基均由广东环凯生物科技有限公司所生产，且由中国药品生物制品检定所检定。 　　1.3稀释液 　　pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（批号200709280 生产单位：广东环凯生物科技有限公司）。0.9%无菌氯化钠溶液 （批号070512生产单位：湖南金健药业有限公司）。 　　1.4 实验用菌种 　　本次验证用微生物名称：大肠埃希菌（Escherichia coli；CMCC（B）44102）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus；{CMCC（B）26003）枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis；CMCC（B）63501）、代白色念珠菌（Candida albicans；CMCC（F）98001）、黑曲霉菌（Aspergillus niger；CMCC（F）98003）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa；CMCC（B）10104）。以上五种菌种代数均为3代。 　　2 实验菌液制备 　　2.1菌液制取步骤 　　（1）取经37？ 培养18～24h金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的肉汤培养物（1ml+9ml）0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5 ～10-7，菌数约为50～100Cfu/ml，做活菌计数备用；（2）取经25？培养24～48h的白色念珠菌的改良马丁培养物（1ml+9ml）0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5 ～10-7，菌数约为50～100 Cfu/ml，做活菌计数备用。（3）接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养5天，加入5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸取孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100Cfu/ml的孢子悬液备用。 　　2.2 供试品溶液的制备 　　取本品10ml，加 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml制成1：10的供试品溶液。 　　3 细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证 　　细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证 取供试液置平皿中，分别污染上述5种代表试验菌株，再加15-20ml规定的琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24-72h，观察结果，平板计数，测定回收率。 　　3.1平皿菌落计数法验证实验操作 　　3.1.1样品本底组 　　用移液管准确吸取1.0ml供试品溶液至平皿中，接种2个平皿；再向该平皿内倒入经验证的灭菌方法消毒后温度保持在45？相应的培养基15～20ml；轻轻转动平皿使培养基与供试品混合均匀。凝固，倒置培养。 　　3.1.2 验证加菌组 　　用移液管分别准确吸取1.0ml（50～100 Cfu/ml）验证用微生物，每种微生物接种2个平皿；再向该平皿内倒入经验证的灭菌方法消毒后温度保持