神经系统染色技术.doc

胶原纤维染色 一、胶原纤维的分布和组成成分 胶原纤维是结缔组织中的三种纤维之一，分布最为广泛，含量最多。主要分布于真皮、腱、韧带、骨、透明软骨、动脉、肠壁 、子宫和基底膜等。胶原纤维具有韧性大，抗拉力强的特点。胶原纤维单位主要由纤维母细胞合成。 二、胶原纤维染色的应用 胶原纤维染色在病理诊断上主要用于鉴定梭形、纤维形细胞肿瘤的组织来源；常常要在纤维、平滑肌和神经三者之中作出选择。还能使用于其他的情况下，如观察动脉硬化的心脏，在HＥ切片中，心肌内散在的小疤痕灶和心肌均被染作红色，而作胶原纤维染色可将胶原组织和上肌明显地区分开来。早期肝硬化用胶原纤维染色，也可使小叶之间少量增生的胶原纤维突出地显示出来。 三、胶原纤维染色的方法 Van Gieson苦味酸酸性复红法 Siriured染色法 Lillie改良Van Gieson法 Clark改良Van Gieson法 Biebric猩红染色法 显示胶原纤维、细胞和肌肉的新染法 四、胶原纤维的常用染色： 胶原纤维在HE染色法被染成粉红色，除此之外，它还可以用一些阴离子的染料来进行染色，如用淡绿可把它们染为绿色，用甲苯胺蓝可将其染为蓝色，在网状纤维染色中，如不加以处理，它又可被染为棕黄色。常用的特殊染色法有Van Gieson.Masson和Mallary等方法。在免疫细胞化学染色中，胶原纤维由于含的负电荷过多，常导致某些非特异性的染色，应特别注意。 Van Gieson（V.G）染色法 I. 试剂的配制： weigert氏苏木素 A液： 苏木素 ?1g （haematoxylin）???无水酒精 100mlB液： 30%三氯化铁 4ml （ferric chloride）???蒸馏水 95ml???盐酸 1ml II．Van Gieson氏液A液： 酸性品红 1g（acid fuchsin）???蒸馏水?? 100mlB液： 苦味酸饱和水溶液，（1.22%）（picric acid） 注意事项： 1、Weigert氏苏木素临用前取A液和B液等份混合，几个小时内用完，最长不得超过一天。 2、苏木素配后经二十多天才能成熟，必须提前配制。 3、该液能抵抗弱酸性染液，对已着染的细胞核在酸性染液的作用，不易被脱去颜色，如果不特别深染，则无须分化。 4、Van Gieson氏液取B液9ml，加入A液1ml，即可使用。 操作方法：（后面的各种方法，如没特别说明，都在室温下进行） 1、切片脱蜡至水，2、用Weigert氏苏木素染20min，3、水洗，必要时可分化，4、流水冲洗10min，5、染Van Gieson氏液1min，6、用95%酒精快速分化，7、无水酒精脱水，二甲苯透明，封固。 结果： 胶原纤维：鲜红色，肌纤维： 黄*色，红细胞： 黄*色，细胞核： 蓝黑或灰色。 注意事项： 1、该法染完的切片，较易褪色如需照相，应尽早完成。2、苏木素染液如为棕色或沉淀，应将其抛弃。3、分化用的酒精，应使用95%以上的酒精，低浓度的酒精褪色能力强，容易将着染的红色脱去。4、切片也可以用天青兰苏木素替代Weigert氏苏木素，染核效果基本一样。 网状纤维染色 一、定义 网状纤维（reticular fiber ）是一种纤细的纤维。它穿行于网状细胞体和突起分支，并互相交织成网，因而被称为网状纤维，又因这种纤维对银的浸染着色特别显著。故又称为嗜银纤维。 二、形成 它的形成主要是在纤维母细胞的粗面内浆网中，合成可溶性胶原。在醛糖、类脂的作用下，形成可溶性胶原，随后它被分泌到细胞外，在基质中（或在细胞的表面）通过原胶原蛋白分子间的交联，聚合成为不溶性的胶原原纤维即网状纤维。 三、特点 网状纤维纤细，直径0.2-1μm,没有弹性，而有韧性，能抵抗胃液的消化和弱酸的腐蚀。它的主要成分也是胶原蛋白，在电镜下也有胶原原纤维特有的周期性横带。因此，网状纤维在分子结构上可能和胶原纤维相似，只不过胶原原纤维补蛋白质和多糖的基质粘聚成束，形成胶原纤维后，从而失去嗜银性。所以胶原纤维银染色呈阴性而网状纤维则呈阳性，网状纤维的原纤维上包有一层糖蛋白，据称这是导致它有嗜银性的原因。 四、分布 网状纤维的分布很广泛，常以两种形式存在。一种是以网状结缔组织形式分布，即有网状纤维和网状细胞同时存在。多分布于造血器官和淋巴网状器官,如红骨髓、脾、淋巴结、肝、扁桃体和胸腺,消化管和呼吸道管壁的淋巴组织内,并成为这些器官的网状支架。另一种是以网状纤维单独存在,没有网状细胞伴随,见于上皮的基底膜,还有平滑肌,脂肪细胞,毛细血管和神经纤维都有网状纤维包裹。我们日常所称的网状纤维染色,主要是显示淋巴网状组织的网状纤维,因为这些组织网状纤维的增多或减少,崩解成断裂,都有助于病理组织上的诊断。 五