01.蛋白质化学(正式).ppt

第一章　蛋白质的结构和功能 异构现象是有机化学中存在着的极为普遍的现象。其异构现象可归纳如下： 1、肽键(peptide bond) ： 概念：在某些理化因素作用下，蛋白质的空间构象破坏，导致若干理化性质和生物学性质的改变。 变性因素： 1）物理因素：高温、高压、射线等 2）化学因素：强酸、强碱、重金属盐等 变性后的表现： 1）生物学活性消失 2）理化性质改变 变性的意义：高温、高压、紫外线杀菌；防止酶制剂失活，等 凝胶过滤（分子筛，gel filtration；排阻色谱）：利用各蛋白质分子大小不同分离。 离子交换：蛋白质的电荷量及性质不同。 阳离子交换剂：CM-纤维素 阴离子交换剂：DEAE-纤维素 亲和层析：抗原-抗体，配体-受体，金属离子，生物素等 高效液相（HPLC）：反相HPLC，离子HPLC，凝胶过滤HPLC 2、一级结构并非影响空间结构的唯一因素 分子伴娘(molecular chaperons，分子伴侣)：在蛋白质加工、折叠形成特定空间构象及穿膜进入细胞器的转位过程中起关键作用的一类特殊分子。 与未折叠的肽段（疏水部分）进行可逆的结合，辅助二硫键的正确形成； 引导肽链的正确折叠并集合多条肽链成为较大的结构； 可以解聚错误聚合的肽段，防止错误发生。 肌红蛋白与血红蛋白的结构 二、空间结构与功能的关系 空间结构体现生物活性：结构相似，功能相似 肌红蛋白(Mb)和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线 Hb与Mb一样能可逆地与O2结合， Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称百分饱和度）随O2浓度变化而改变。 空间结构体现生物活性：结构改变，功能改变 O2 血红素与氧结合后，铁原子半径变小，就能进入卟啉环的小孔中，继而引起肽链位置的变动。 一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为协同效应(cooperativity) 。 正协同效应(positive cooperativity)：促进作用 负协同效应(negative cooperativity)：抑制作用 别构效应（变位效应，allosteric effect）：蛋白质分子的特定部位与小分子化合物结合后，引起空间构象改变，从而促使生物学活性变化的现象。 疯牛病中的蛋白质构象改变 疯牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一组人和动物神经退行性病变。 正常的PrP富含α-螺旋，称为PrPc。 PrPc在某种未知蛋白质的作用下可转变成全为β-折叠的PrPsc，从而致病。 PrPc α-螺旋 PrPsc β-折叠 正常 疯牛病 朊病毒致病过程中的构象变化示意图 1、空间结构体现生物特异性 2、空间结构体现生物活性 3、空间结构的灵活性，体现了生物活性的可调节特性 空间结构中的特定区域体现生物活性 小结 别构效应（别位效应、变位效应，allosteric effect）：蛋白质分子的特定部位（调节部位）与小分子化合物（效应物）结合后，引起空间构象发生改变，从而促使生物学活性变化的现象称为变构效应。包括正协同、负协同效应 【经典举例】血红蛋白（Hb）：由α2β2四聚体组成，每个亚基含有1个血红素辅基；Hb的氧解离曲线呈“S”型。 多种空间构象，多种活性状态 4、空间构象并非生物活性的唯一影响因素 【举例】低温下酶活性低，但并不影响构象；盐析时沉淀的酶无活性，但构象不变。 5、蛋白构象疾病：错误构象相互聚集，形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病。 老年痴呆 疯牛病 亨汀顿舞蹈病 1、蛋白质的变性与复性 去除部分变性剂 温和复性 温和复性 天然蛋白 （具有正确的一级结构和高级结构，因此具有生物活性） 变性蛋白 （具有正确的一级结构但无高级结构，无生物活性） 变性环境 非天然蛋白 （具有正确的一级结构和错误的高级结构，无生物活性） 【经典举例】Rnase 小结 2、前体蛋白与活性蛋白的转变 （切除冗余及其它变化） 前体蛋白 （一级结构冗余，高级结构错误，因此无生物活性） 活性蛋白 （具有正确的一级结构和高级结构，因此具有生物活性） 适合环境 【经典举例】酶原激活：胃蛋白酶原切除N端42个氨基酸后形成活性中心及其他空间构象，转变为具水解蛋白质活性的胃蛋白酶；胰蛋白酶原切除N端6个氨基酸后形成活性中心及其他正确构象，转变为具有水解活性的胰蛋白酶。 3、分子病（molecular disease）：由于基因结构改变，蛋白质一级结构中的关键氨基酸发生改变，从而导致蛋白质功能障碍，出现相应的临床症状，这类遗传性疾病称为分子病。 【经典举例】镰形细胞贫血症：编码珠蛋白β链的结构基因第六个密码子由CTT→CAT，相应的多肽序列中N端的第六个氨基酸由Glu→Vla；其空间结构发