低氧对人胎盘间充质干细胞向类髓核细胞诱导分化的生物学作用中文.PDF

低氧对人胎盘间充质干细胞向类髓核细胞诱导分化的生物学作用 中文摘要 低氧对人胎盘间充质干细胞向类髓核细胞 诱导分化的生物学作用 中文摘要 目的：体外分离培养人胎盘间充质干细胞（PMSCs ）并观察其生物学特性；比较不同 氧浓度对 PMSCs 向类髓核细胞诱导分化的生物学影响。 方法： 第一部分：人胎盘间充质干细胞的分离培养和鉴定 采用酶消化加贴壁培养法分离培养人 PMSCs ，流式细胞仪器(FCM)鉴定 PMSCs 表面标志，经成骨、成脂肪诱导鉴定其分化能力。 第二部分：低氧对人胎盘间充质干细胞向类髓核细胞诱导分化的生物学作用 在不同氧浓度下(5%，21%) ，用含有转化生长因子- β1 （TGF- β1）的培养基诱 导培养 PMSCs ，CCK-8 法比较 1 d，3 d，5 d，7 d 不同氧浓度下分化细胞的增殖情况； 3 d，7 d 时实时荧光PCR 法检测 HIF-1α，Sox- 9, Collagen II 和 Aggrecan 基因的相对 表达，比较不同氧浓度对 PMSCs 向类髓核细胞定向分化的影响；诱导培养 2 周后， 行免疫荧光检测 II 型胶原在分化细胞中的表达。 结果：① PMSCs 体外分离培养，其增殖迅速，短时间内可大量扩增达到组织工程需 要的种子细胞数量要求；FCM 检测 PMSCs 的表面抗原 CD73 、CD29 、CD44 、 CD105 均有不同程度表达， CD34 、CD45 和 HLA-DR 低表达或不表达，且细胞保 持未分化状态；经诱导后可向成骨和成脂细胞方向分化。② 通过 CCK-8 法对细胞增 殖检测发现诱导的第 1d，不同氧浓度下两组细胞都处于生长潜伏期，增殖速度无明 显差异（p 0.05 ）；第3 d 起两组细胞增殖明显，且低氧组明显高于常氧组（p 0.05 ）； 第 5 d 增殖达到高峰，同样低氧组明显高于常氧组（p 0.05 ）；第7 d，两组细胞增殖 下降，增殖速度无明显差异（p 0.05 ）,显示低氧对PMSCs 诱导早期的增殖是有促进 作用的。③实时荧光 PCR 显示 PMSCs 诱导培养 3d 时诱导组较对照组 Sox- 9 基因表 达有明显差异（p 0 .05 ），且低氧组高于常氧组（p 0.05 ），Collagen II 和 Aggrecan I 中文摘要 低氧对人胎盘间充质干细胞向类髓核细胞诱导分化的生物学作用 基因较对照组无明显差异（p 0.05 ）； 7 d 后 Sox- 9, Collagen II 和 Aggrecan 基因相 对表达量在常氧组和低氧组都较非诱导组有显著增加(p 0.05) ， 且低氧组高于常氧 组( p 0.05) ，同时，低氧条件下，各时间点 HIF-1α的相对表达量较常氧组有明显增 加(P 0.05) ，结果说明，髓核诱导剂能够诱导PMSCs 表达 Sox-9, Collegen II、Aggrecan 基因, 低氧通过 HIF-1α进一步加强了这一诱导效应。④诱导培养 2 周后，行 II 型 胶原免疫荧光检测发现两组细胞均表达 II 型胶原，提示细胞呈类髓核细胞转化，且 低氧组荧光染色较常氧组深。 结论：①人胎盘来源的间充质干细胞在体外可成功培养并大量扩增，生物学性状稳定， 是组织工程优良的种子细胞来源之一。②本实验在单层培养条件下，成功将人胎盘间 充质干细胞诱导分化成类髓核细胞，低氧能够促进其分化效应。 关键词：低氧，胎盘间充质干细胞，髓核细胞，转化生长因子-β1 作 者：倪 莉 指导教师：杨惠林 II