合肥市奶牛性别控制人工授精操作技术规范.doc

DB34/T ××××—×××× PAGE II PAGE 1 合肥市质量技术监督局 发布2010-01-22实施2010- 合肥市质量技术监督局 发布 2010-01-22实施 2010-01-22发布 奶牛性控冻精人工授精操作技术规范 DB3401/T 58—2010 DB34/××××-×××× DB3401 合肥市地方标准 01 DB3401/T 58–2010 前 言 本标准由合肥市动物疫病预防控制中心提出。 本标准由合肥市畜牧水产局归口。 本标准起草单位：合肥市动物疫病预防控制中心。 本标准主要起草人：张尚坤、于乐、陈俊、郑新勇。 本标准于2010年1月22日发布实施。 PAGE 3 奶牛性控冻精人工授精操作技术规范 范围 本标准规定了经过X、Y精子分离后的冷冻X精液对奶牛进行人工授精的操作方法和程序。 本标准适用于安徽省合肥市各地所有奶牛场（户）使用性别控制冷冻精液配种操作。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB 4143-2008 牛冷冻精液 DB34/T089-1993 牛人工授精操作规程 术语和定义： 性控精液： 性控精液是指对雄性动物（本规范指公牛）所产生的精液，通过人为方法将X、Y精子进行科学分离，从而有目的地控制后代出生性别的精液。 人工授精： 人工授精技术指以非直接性交方式将精子置于雌性动物生殖道内（子宫腔内)，使精卵结合达到妊娠生育后代的一种生殖技术。 情期受胎率 母牛的一个发情期中输精后，受胎母牛占输精母牛的百分比。 繁殖率 年度内出生的犊牛数占年度能繁殖母牛数的百分比。 母犊率 年度内实际出生的母犊牛数占年度内总出生犊牛数的百分比。 授精前的准备 4.1人工授精室（或精液处理室）应配备显微镜、恒温水浴锅、液氮储存罐、液氮运输罐、输精器械、长把镊子、温度计和消毒药品。 4.2人工授精室应干净卫生、无尘、无烟、无气味；干燥、通风、温度适宜；无蚊蝇，没有阳光直射，并保持摆放整洁。办公间与操作室分开，配备必要的办公用品和防护用品，各种记录表格齐全。 4.3授精器械使用前应清洗、消毒；也可使用70%左右的酒精药棉擦拭消毒，输精枪外套塑料薄膜应现用现坼，防止长期暴露在空气中。 4.4人工授精员：应具备畜牧兽医专业中专以上学历或同等培训学历，具备一定的动物繁殖、生理、病理、药理和生殖激素基本知识，技术水平较高、责任心较强。 4.5性控冻精人工授精员要求有较高的发情观察能力、直肠检查卵泡发育、准确把握输精位置、细心操作等综合能力，还要准确判断子宫炎症并及时治疗，会合理使用生殖激素。 性控冷冻精液的解冻与携带 5.1细管冷冻精液的解冻方法：从液氮罐中取冻精时，提桶中的冻精不可超过液氮罐口，如果10秒钟内还没有将冻精取出，应将冻精立刻沉入液氮中，然后再提到罐口重复操作； 5.2 单支冻精取出后在空气中先停留5秒左右，让液氮充分挥发，然后放入38-40℃温水中摇晃10秒钟等精液完全溶解后取出，用干脱脂棉或卫生纸擦干后剪齐封口，装入输精器内准备输精。解冻后精液必须现解冻现用。 5.3解冻后精液确需携带运输的，应保持在5~25℃温度之间，用清洁卫生纸包裹，避光随身携带，应在1小时内完成输精操作。 解冻后的精液品质检查 6.1性控精子品质指标：活力、密度、畸形率、顶体完整率、细菌数等，其中活力与密度是主要指标，参见GB 4143-2008。性控冻精质量国内还没有统一标准。一般要求装管精子数不少于250万/支（0.25ml剂型）；活力＞0.4；性控比率（X精子）不低于90%。 6.2精子活力显微镜检查方法：抽取解冻后的精液均匀撒布在载玻片上，用盖玻片盖上，在37℃的温度环境下镜检，显微镜以放大160-400倍为宜。每个滴片要观察2-3个视野，并注意观察不同层次的精子运动，确定呈直线前进运动精子所占的百分比例即为精子的活力，同时查看精液的稠密程度。 6.3精子活力计算方法：在血球计数板上数出死精子个数，然后用高温杀死全部精子，再数出总精子数。 精子活力（%）=[（总精子数-死精子数）/总精子数]×100% 性控冻精活力低于0.35、密度低于每剂250万个有效精子数，不得用于输精。 输精时机正确把握 应根据母牛发情出现的以下几方面基本情况综合判定最佳输精时间。 7.1母牛精神上由兴奋、不停走动，追逐其他母牛，并爬跨它牛，到“静立”接受它牛爬跨不动，待8-10小时后输精较好。 7.2发情时外阴有透明线状粘液流出，或粘于外阴周围，流出透明粘液由稀薄变粘稠，具有强拉丝性时输