蛋白生物素标记应用指引.PDF

蛋白的生物素标记操作指南 （Octet 分子互作仪器测定专用） 概述 链霉亲和素与生物素之间的相互作用是目前已知强度最高的非共价作用，并 且二者的结合稳定性好，专一性强，不受试剂浓度，pH 环境，抑或蛋白变性剂 等有机溶剂影响。因此，链霉亲和素与生物素快速，稳定和不可逆非共价的结合 被 广 泛 应 用 于 研 究 生 物 分 子 间 的 相 互 作 用 。 Octet 平 台 的 链 霉 亲 和 素 （SA/SAX/SSA ） 生 物 传 感 器 已 被 开 发 用 于 蛋 白 定 量 和 动 力 学 ， 结 合在 SA//SAX/SSA 传感器上的第一个蛋白质必须进行生物素化标记 。为方便利用 Octet 平台上的 SA/SAX/SSA 传感器进行动力学和定量分析，特制订本指南为利 用生物素化试剂标记 目标蛋白提供指导。 生物素试剂的选择 常见的 ThermoFisher 公司 （其他厂商或品牌的用法类似）的 EZ-Link 生物 素试剂及试剂盒可以根据不同的反应基团（氨基 、巯基 、醛基等）有效地标记不 同蛋白、多肽及其他生物分子，同时可以根据特殊的用途对这些试剂的化学性质 （溶解性、臂长、可剪切与否）进行优化。综合考虑反应基团、linker 长度以及 水溶性等因素 ，选择适合的生物素试剂或试剂盒。推荐的几种生物素化试剂见下 表 ： 是否提供 是否溶 是否可 是否能够 产品货号 名称 反应基团 间隔臂长 试剂盒 于水 剪切 透膜② 21338 Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin 否 伯胺 是 30.5 Å 否 否 21312 NHS-PEG12-Biotin 否 伯胺 是 56.0 Å 否 否 21343 NHS-LC-LC-Biotin 否 伯胺 否 30.5 Å 否 是 21911 Maleimide-PEG11-Biotin 否 巯基 是 59.1Å 否 否 21900 Biotin-BMCC 否 巯基 否 32.6Å 否 是 21347 Amine -PEG3-Biotin 否 羧基 是 22.9Å 否 否 21360 Biotin-PEG4- Hydrazide 否 糖基 是 31.3Å 否 否 21303 TFPA -PEG3-Biotin 否 DNA/RNA/蛋白 否 33.4Å 否 否 29986 Psoralen-PEG3-Biotin 否 DNA/RNA/蛋白 是 36.9Å 否 否 具体的包装和说明书见厂家的说明书 ，下面的 protocol 是以产品货号：21312，NHS-PEG12- Biotin 为例。 生物素化试剂建议购买小包装，使用 DMSO 溶解配制成 10 mM 母液保存于-20℃备用。 产品货号 ：21312 的 NHS-PEG12-Biotin 为例 ：10 mM 母液的配制案例= （生物素化试剂质量 1mg）÷ （生物素分子量 941 Da） × 100=0.106 mL，1 mg 生物素化试剂溶于 0.106 mL DMSO 中即为 10 mM 母液 。 1 氨基偶联生物素化试剂反应示意图 实验试剂和耗材 1) 缓冲液 ：DMSO，1×PBS，PBST （PBS+0.02% tween20） 2) 掌上离心机，一台 3) 生物素标记试剂 EZ