磷酸盐洗脱液再生IMAC-Cu蛋白质芯片-地球科学进展.PDF

第２８卷 第２期 应 用 化 学 Ｖｏｌ．２８Ｉｓｓ．２ ２０１１年２月 　　　　　　　ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＰＰＬＩＥＤＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　　　　　　　 Ｆｅｂ．２０１１ 磷酸盐洗脱液再生ＩＭＡＣＣｕ蛋白质芯片 ａ ｂ ｂ ｃ 蔡　羽　杜　涛　赵胜利 　高春芳 ａ ｂ （河南科技大学信息管理研究所　洛阳；河南科技大学材料学院　洛阳４７１００３； ｃ解放军第１５０医院　洛阳） 摘　要　使用扫描电子显微镜（ＳＥＭ）和蛋白质芯片检测系统考察了磷酸盐洗脱液ｐＨ值和竞争洗脱剂对 ＩＭＡＣＣｕ蛋白质芯片再生的影响。结果表明，随着磷酸盐洗脱液ｐＨ值降低，芯片所吸附的蛋白质越容易被去 除，但对芯片表面化学结构的破坏也随之加剧。在洗脱液中加入竞争洗脱剂乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）或甘氨酸 （Ｇｌｙ）可有效改善蛋白质的洗脱效果。当磷酸盐洗脱液ｐＨ＝６５、竞争洗脱剂为００２ｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ、洗脱时间 ７２ｈ时，芯片的再生效果最佳。 关键词　蛋白质芯片，磷酸盐洗脱液，再生 中图分类号：Ｏ６４７　　　　　文献标识码：Ａ　　　　　文章编号：１００００５１８（２０１１）０２０２１９０５ ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１０９５．２０１１．００２１１ 蛋白质芯片飞行质谱时间技术是继基因芯片之后的新一代生物芯片技术，它集芯片和质谱于一 ［１２］ 身，具有分析速度快、简便易行、高灵敏度和高通量等特点 。目前，蛋白质芯片在疾病诊断、预防以及 ［３］ 新药开发等方面有着极强的优越性 ，在很多领域有着广阔的发展前景，特别在恶性肿瘤标志物的筛 ［４］ 选方面已得到广泛应用 。然而，蛋白质芯片价格高昂，并且主要为一次性的，没有再生利用，限制了它 ［５］ 的使用和推广，也给医务工作者和患者带来了不便 。本文基于固定金属离子亲和色谱（ＩＭＡＣ）洗脱及 再生的基本原理，初步研究了已使用过的ＩＭＡＣＣｕ蛋白质芯片的再生行为，考察了磷酸盐洗脱液ｐＨ值 及竞争洗脱剂对再生效果的影响。 １　实验部分 将已使用过的ＩＭＡＣＣｕ蛋白质芯片（Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ公司）置于洗脱液中，以去除芯片上吸附的蛋白质。 螯合铜离子后，对蛋白质固定及检测，检测过程见参考文献［６］。其中芯池Ａ为未曾使用的新鲜芯片作 为空白对照，Ｂ为再生芯片的空白对照，Ｃ为再生芯片吸附癌症患者血清蛋白后的质谱图，Ｄ为新鲜芯 片吸附癌症患者血清蛋白后的质谱图。洗脱液由含０５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ的磷酸盐缓冲溶液和竞争洗脱剂两 部分组成，竞争洗脱剂为甘氨酸（Ｇｌｙ）或乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）。其中，磷酸盐缓冲溶液由００２ｍｏｌ／Ｌ磷 酸二氢钠和００２ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾组成，用ＨＣｌ与ＮａＯＨ调节溶液的ｐＨ值。已使用过的ＩＭＡＣＣｕ蛋 白质芯片和癌症患者的血清蛋白均来自洛阳解放军第 １５０医院。磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、ＥＤＴＡ、 ＮａＯＨ、ＮａＣｌ、Ｇｌｙ与盐酸均为分析纯试剂。使用日本电子株式会社 ＪＳＭ５６１０ＬＶ型扫描电子显微镜 （ＳＥＭ）分析蛋白质芯片的表面形貌，利用美国Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ生物系统公司的表面增强激光解析离子化飞 行时间质谱仪（ＳＥＬＤＩＴＯＦＭＳ）检测芯片表面蛋白质的吸附效果。 ２　结果与讨论 ２．１　洗脱液ｐＨ值的影响 在洗脱７２ｈ时考察了不同ｐＨ值磷酸盐洗脱液对蛋白质芯片洗脱效果的影响，如图１所示。从图１ ２０１００４１２收稿，２０１００７１５修回 资助项目；河南省基础与前沿研究计划（０７２３００４４００６０） 国家自然科学基金（ 通讯联系人：赵胜利，副教授；Ｔｅｌ：０３７９Ｆａｘ：０３７９６４２３０