GB/T 25165-2010明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法　实时荧光PCR法.pdf

ICS65．020．30 B43 雪亘 中华人民共和国国家标准 25165—2010 GB／T 明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法 实时荧光PCR法 ofidentificationof and derived Protocol bovine，caprine，ovineporcine materialsin timePCRmethod gelatin--Real 201 2010-09-26发布 1-05-01实施 宰瞀鹊鬻瓣訾矬瞥霎发布中国国家标准化管理委员会仪19 25165—2010 GB／T 前 言 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：陈颖、吴亚君、袁飞、王晶、徐宝梁、张舒亚、杨海荣、王斌、赵勇胜。 25165—2010 GB／T 明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法 实时荧光PCR法 1范围 本标准规定了明胶中牛、羊、猪源性成分的实时荧光PCR检测方法。 本标准适用于明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测。 该方法的检出限为0．1％。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB／T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB 6783食品添加剂明胶 GB／T14699．1饲料采样 GB／T27403--2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3．1 realtime 实时荧光PeR PCR 在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。 3．2 threshold Ct值cycle 每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 4原理 利用实时荧光PCR技术，根据不同物种的特异性基因序列对牛、羊、猪源性成分进行鉴定。利用裂 解液破碎细胞，酚、三氯甲烷抽提蛋白质，异丙醇沉淀得到DNA；以提取的DNA为模板进行内参照基 因的实时荧光PCR检测，以确定样品DNA的提取效率；通过特异性引物和标记荧光物质探针进行牛、 羊、猪源性成分的实时荧光PCR扩增，根据PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的强弱判定，实 现对明胶中牛、羊、猪源性成分的定性分析。 5检测用引物和探针 内参照引物探针序列及牛、羊、猪特异性引物探针序列见表1。 25165—2010 GB／T