微生物蛋白的提取和分离纯化yapekiux.pptVIP

凝胶过滤层析的操作过程 1. 凝胶的选择 2. 装柱 3. 平衡（equilibrium) 4. 上样(loading) 5. 洗脱(elution) 6. 凝胶再生和保养 平衡缓冲液应与洗脱缓冲液相同 缓冲液种类、pH、离子强度和添加剂的选择应根据溶液与基质的相互作用、可溶性和样品的生化性质、以及后续操作的要求等选择。使用前通过0.45μm的膜过滤，可防止不溶性小颗粒堵塞柱子。 平衡体积至少为5倍床体积。 样品集中上样后，加洗脱液，防止返混 洗脱液成份应与膨胀胶和平衡时所用的液体相同 * 层析结果见图，分别收集峰，测定酶活，其中A峰活性最高，占上样总活性的85.14%，因此收集峰A，进行下一步层析。 * 层析结果见图，采用步进式洗脱，收集各个峰，测定酶活力。其中峰b酶活最高，占上样总活力的8.534%，因此收集峰b，浓缩后进行下一步层析。 * 发现峰A酶活最高，占总活活力的47.44%， 通过SDS一PAGE检测显示为单带。 * * 析结果见图，层析图表明样品仅有一个单峰，结合SDS结果，可以证明贵州绿僵菌AS3.4608所产壳聚糖酶是单亚基蛋白。 * 在蛋白质纯化的起始阶段，合适的粗分离手段能大大降低后续操作的难度。在传统的粗分离方法中，实验室一般采用盐析(如硫酸铵)分段沉淀，使用该法蛋白质不易失活，但是操作体积较大，后处理麻烦，不能直接进行离子交换层析，需要进行