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多种分离方法分离脐血造血细胞效率比较 　　摘 要：目的：比较多种分离方法分离脐血造血细胞的效率。方法：依据随机方法将133例脐血标本分为3组，A组选择HES法，B组选择Ficoll法，C组选择明胶法。所有标本均进行CD34+细胞检测，同时进行造血祖细胞体外培养。结果：A组CD34+细胞产率明显高于B组，C组CD34+细胞产率明显高于B组，A组CD34+细胞产率明显C组，组间两两比较差异有统计学意义（P0.05）；A组CFCs产率明显高于B组，C组CFCs产率明显高于B组，A组CFCs产率明显C组，组间两两比较差异有统计学意义（P0.05）。结论：在分离脐血造血细胞过程中，HES法的分离效率高于HES法、明胶法。 　　关键词：脐血造血细胞；HES法；Ficoll法；明胶法；效率 　　脐血造血细胞分离是脐血移植过程中的重要环节，也是脐血库建立的关键性步骤，对血液病患者的疾病治疗有着重要的作用。目前，最常见的脐血造血细胞分离方法为HES法、Ficoll法、明胶法，其中HES法的分离效率较高，其体积浓缩效果较好。本研究将133例脐血标本分为3组，3组分别应用HES法、Ficoll法及明胶法，比较3组的分离效果，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　本研究共133例脐血标本，均由我市某医院妇产科提供，脐血标本采集量50.2-140.5ml，平均81.7ml。标本采集后保存于4℃的温度条件下，保存时间控制在24h之内。依据随机方法，将133例脐血标本分为3组，A组45例，B组44例，C组44例。 　　1.2 方法 　　1.2.1 HES法 　　A组45例标本选择HES法，即在整份脐血中加入25%的羟乙基淀粉60g/L，混合均匀后进行500r/min离心处理，时间控制在5min，之后去掉红细胞，再进行1200r/min离心处理，时间控制在13min，将部分血浆去掉，确保体积浓缩至25ml左右，最后将白细胞重悬在剩余的血浆中。 　　1.2.2 Ficoll法 　　B组44例标本选择Ficoll法，即选择Ficoll 10ml，相对密度为1.077，将其置于离心管（50ml）中。每例标本取10ml脐血，并置于液面上，之后进行1800r/min离心处理，时间控制在10min，选择白细胞层重悬在RPMI 1640培养液10ml中。 　　1.2.3 明胶法 　　C组44例标本选择明胶法，即从44例标本中顺利取出20ml，并放置于离心管（50ml）与30g/L明胶（20ml）中，混合均匀后，进行30min沉降处理，之后将上清液置于另一个离心管（50ml）中，添加50% 30g/L明胶，进行30min沉淀处理，保留上清液。 　　1.2.4 CD34+细胞检测 　　抗体主要选择美国Pharmigen公司生产的抗人CD34抗体，同时选择美国BectonDick-inshon公司生产的流式细胞仪进行检测。将抗体20μl置入脐血100μl中，混合均匀后在4℃温度条件下进行30min孵育，选择氯化铵裂解红细胞，时间控制在30min，之后进行两次PBS洗涤，选择多聚甲醛进行固定后再实施检测，同时开淋巴细胞窗。 　　1.2.5 造血祖细胞体外培养 　　选择体外培养方法，培养体系主要选择甲基纤维素半固体培养基，其包括四个成分，即白细胞介素-3（10ng/ml）、粒细胞集落刺激因子（200ng/ml）、干细胞因子（50ng/ml）、红细胞生成素（1U/ml）。选择2×105个有核细胞，将其置于2ml培养体系中，并在体积分数保持在5% CO2、温度保持在37℃基础上进行14d的培养，之后分别计数BFU-E、CFU-GM以及CFU-Mix，同时准确计算出三者之和，即CFCs[1]。 　　1.3 统计学方法 　　选择SPSS10.0软件进行统计分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，选择ANOVA与 Bonferroni 两两比较方法进行分析，当P0.05时表示差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 CD34+细胞产率 　　A组分离前CD34+细胞为（8.81±1.90）×107，分离后CD34+细胞为（8.67±1.67）×107，产率为（98.15±5.68）%；B组分离前CD34+细胞为（1.08±0.40）×107，分离后CD34+细胞为（0.36±0.01）×107，产率为（32.85±4.77）%；C组分离前CD34+细胞为（2.17±0.69）×107，分离后CD34+细胞为（2.08±10.36）×107，产率为（81.46±5.93）%。A组CD34+细胞产率高于B组，C组CD34+细胞产率高于B组，A组CD34+细胞产率高于C组，组间两两比较差异有统计学意义（P0.05）。 　　2.