第九节培养基与实验操作基本技术.ppt

2. 自 Plate 上取單一菌落 (方法一：蓋子微開遮住培養基，避免空氣中菌體掉入) (方法二：plate 反面拿起) 无菌操作 – 取菌技巧 2 1. 擠出安全吸球內空氣，插上滅過菌之玻璃吸管 2. 向上為吸，向下為放 无菌操作 – 取菌技巧 3 1. 調整 Pipetman 刻度 (P1000 吸取範圍 200 ~ 1000μl) 2. 插上滅過菌之 Tip (用力插緊) 无菌操作 – 取菌技巧 4 3. 按鈕壓至第一段 (不可壓至最底) 4. 深入液面下 2 ~ 4 mm 无菌操作 – 取菌技巧 4 5. 慢慢釋放按鈕，即可 吸取液體 无菌操作 – 取菌技巧 4 1. 試管前端過火 2. 打開試管蓋 无菌操作 – 接菌技巧 方法一：以接種環沾菌，放入新的培養基中接菌 方法三：以Pipetman 吸取菌液，按鈕壓至最底排出菌液 方法二：以安全吸球吸取菌液，放入新的培養基中，向下排出菌液 无菌操作 – 接菌技巧 8、培养基的质量测试 （１）如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pH。 （２）将全部培养基放入36±1°C恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。 （３）用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基，培养24～48小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。　　 9、培养基的保存 （1）基础培养基不能超过两周 （2）生化试验培养基不宜超过一周， （3）选择性或鉴别性培养最好当天使用，倾注的平板培养基不宜超过3天。 思考题 1、加入培养基中的抑制剂有什么作用，常用的抑制剂有哪些？ 2、在制备培养基时，将各成份溶化时要注意哪些问题？ 3、在制备培养基时，如何进行培养基pH的初步调正？ 4、如何选择培养基的灭菌条件？ 5、如何进行培养基的保存？ 培养基配制 – 器材 培养基、玻璃器皿天平秤、药匙 培养基配制 – 仪器 杀菌锅 (Autoclave) 无菌操作台 (Laminar flow) 培养基的配制 – 装水 以量桶裝取適當量蒸馏水於玻璃容器中 於玻璃容器上标示培养基名称 培養基配製 – 秤藥 放上秤藥紙並歸零 以秤藥匙舀出適當量培養基 (請看培養基罐上說明) 培養基配製 – 溶解培養基 傾倒培養基時小心不要沾到玻璃壁上 注意事項 – 配藥結束 清理配藥桌面與天平 清洗秤藥匙，擦乾放回 藥品放回藥品櫃 培養基配製 – 分裝 調整分注器 (Dispensette) 刻度 分裝試管 蓋上試管蓋 放入杀菌锅 (Autoclave) 灭菌 培養基配製 – 灭菌 加水蓋過鐵板 放東西 關門 調整溫度時間 關緊洩壓閥 注意事項 – 杀菌锅的使用 注意事項 – 殺菌釜使用 滅菌結束後，等壓力降回零時才可打開門 進入殺菌釜 之物品，蓋子不可關太緊或太鬆 注意事項 – 殺菌釜使用 拿滅菌後物品請記得帶耐熱手套 培養基配製 – 平板培養基 滅過菌之固態培養基於無菌操作台 (Laminar flow)內倒製平板培養基 (Plate) 日光燈 UV燈 風扇 第二节、微生物检验的基本操作技术 主要内容 无菌技术 M的接种与分离技术 微生物的培养方法 微生物的生长现象与观察 一、无菌技术 （一）什么是无菌技术 　　指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。 （二）无菌环境 无菌室 无菌柜 超净工作台 1、无菌室 （1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间 （2）无菌室的消毒和防污染 每日（使用前）紫外线照射（1~2小时）. 每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）. 每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。 2、超净工作台 ??? 超净台的使用与保养: （1）风速保持在0.32-0.48米/秒; （2）使用前开启紫外灯照射30分钟以上; （3）让超净台预工作10－15分钟; （4）使用完毕后，用70%酒精将台面和台内四周擦拭干净. （三）无菌器材 灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等. 消毒器材：无菌室内的凳子、试管架、天平、工作台、手等 （四）无菌操作 1、目的： （1）是保证待检物品不被环境中微生物的污染； （2）是防止被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。 2、进入无菌室前的准备 （1）、定期检查无菌环境的空气是否符合规定； （2）、用紫外线灭菌处理30~60分钟； （3）、检查无菌器材是否完备； （4）、洗手消毒； （5）、手部消毒后，再穿戴无菌工作服。 3、检验操作过程的无菌操作要求 （1）、在操作中不应有大