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太湖流域中华鳖不同群体遗传多样性AFLP分析 　　摘要：基于AFLP分子标记技术对太湖流域中华鳖花鳖群体和普通群体进行了遗传多样性分析。结果表明，用6对引物对2个群体52个中华鳖个体进行检测，共获得335个位点，其中多态位点88个，平均多态位点比例为 26.27%。普通群体和花鳖群体的Shannons指数分别为0.377 9、0.229 2，Neis指数分别为0.257 3、0.151 2，显示2个群体遗传多样性处于同一水平；中华鳖花鳖群体和普通群体的种间遗传相似度为0.948 3，遗传距离为0.531；通过UPGMA法对2个群体进行聚类分析显示，两者基本能够分别聚类，产生了一定的遗传趋异；太湖流域2个群体中华鳖的遗传多样性相对贫乏，花鳖群体与普通群体产生了一定程度的遗传分化，可能分属于不同的亚种群。 　　关键词：中华鳖；AFLP；遗传多样性；遗传分化 　　中图分类号： Q959.6+3；S917文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2016）12-0101-03 　　收稿日期：2016-07-16 　　基金项目：江苏省科技支撑计划（编号：BE2013349）。 　　作者简介：韩晓磊（1981―），男，河北邯郸人，硕士，实验师，主要从事淡水水生生物学研究。E-mail：hanxiaolei0724@163.com。 　　通信作者：韩曜平，博士，教授，主要从事水产品生态养殖技术研究与示范推广。E-mail：975683768@。 　　扩增片段长度多态性（amplified fragment length polymorphism，AFLP）技术具有多态性丰富、显性表达、无复等位效应、灵敏度高、快速高效等优点，可在较短时间内掌握大量遗传信息，已被广泛应用于水生动物遗传多样性分析、种质鉴定、遗传连锁图谱的构建及系统分类等方面[1-3]。中华鳖（Pelodiscus sinensis）隶属于爬行纲（Reptilia）、龟鳖目（Testudoformes）、鳖科（Trionychidae），别称甲鱼、团鱼、王八等。中华鳖在我国分布广泛，除西藏、青海外的其他各省（市、区）均有发现，长江流域和华南地区分布较多[4-5]。太湖花鳖属于中华鳖的地方特色品种，主要生活在长江中下游特别是太湖流域，因其背上有对称的黑色小圆花点，在野生环境中身体油绿，裙边宽厚，腹部有灰黑色块状花斑，故此得名。太湖花鳖野性十足，具有生长快、色泽艳、肉质好等特点，并因其独特的风味和较高的营养价值深受消费者喜爱。江浙地区广泛养殖太湖花鳖，市场前景良好。研究显示，中华鳖还没有明确的亚种分类，但却存在一些不同的地理群体，其中太湖花鳖的分类地位也没有明确论断[6]。本研究利用AFLP分子标记技术对太湖流域中?A鳖花鳖群体和普通群体进行遗传多样性分析，判断2个群体是否有遗传分化，以期为太湖流域中华鳖不同群体间的种质鉴定和分类地位提供理论支持。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　2个中华鳖群体样品采集于2014年5―10月期间，其中花鳖群体采集于太湖流域的江苏省太仓地区（简称T，野生群体，图1），普通群体采集于太湖流域的江苏省常州地区（简称C，野生群体，图2）。以中华鳖腿部肌肉组织为材料，于无水乙醇中-20 ℃保存备用，分别取30尾T群体、22尾C群体用于AFLP分析。 　　1.2DNA提取 　　中华鳖基因组DNA的提取参照韩晓磊等的方法[7]。用分光光度计（Thermo Scientific NanoDrop 2000）测定基因组DNA的浓度，并通过凝胶成相系统（UVP Biospectrum 410）检测DNA的完整性，置-20 ℃保存备用。 　　1.3AFLP分析 　　参照韩晓磊等的方法[7]构建AFLP图谱，引物、人工接头由苏州金唯智生物科技有限公司合成，选择性扩增使用了3种EcoRⅠ引物、3种MseⅠ引物共9个引物组合，接头序列、预扩增引物序列、选择性引物序列见表1。根据预试验结果，从扩增带数目适中、多态性高的引物组合中选取了E38M51、E38M54、E42M51、E42M54、E44M48、E44M51等6组引物组合。扩增产物在4.5%聚丙烯酰胺凝胶上进行60 W恒功率高压电泳，对电泳结果进行银染检测。 　　1.4数据分析 　　将电泳图谱中同一位置上有无AFLP条带情况进行统计，有条带的记为“1”，无条带的记为“0”，得出“0，1”原始数据矩阵。对AFLP数据进行分析统计的遗传学参数主要如下。 　　显性基因型频率Pd计算公式为： 　　[JZ（]Pd=ni/n；[JZ）][JY]（1） 　　式中：ni为位点i上有带的个体数，n为总个体数。 　　多态位点比率P计算公式为： 　　[JZ（]P=多态位点数/位点总