实验七.Hb及核黄素的凝胶层析简化.pptVIP

凝胶过滤分离蛋白质 * 层析理论及技术 1. 层析（chromatography）： 层析法又称色层分析法或色谱法（Chromatography）。层析法是一种基于被分离物质的物理、化学及生物学特性的不同，使它们在某种基质中移动速度不同而进行分离和分析的方法。例如：我们利用物质在溶解度、吸附能力、立体化学特性及分子的大小、带电情况及离子交换、亲和力的大小及特异的生物学反应等方面的差异，使其在流动相与固定相之间的分配系数（或称分配常数）不同，达到彼此分离的目的。 层析系统分为两个相：固定相和流动相。由于各组分受固定相的阻力和受流动相的推力影响不同，各组分移动速度也各异，从而使各组分得以分离。此法首先用于有色物质的分离，故又称色层析法。 层析法是近代生物化学最常用的分析法之一，此法可以分离性质极为相似、而用一般化学方法难以分离的各种化合物，如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。 2. 层析的分类： 2.1根据两相所处状态：气相层析；固相层析 2.2根据层析分离机制：吸附层析；分配层析；离子交换层析；凝胶层析；亲和层析 2.3根据操作形式不同：柱层析；薄层层析；纸层析；薄膜层析 3.常用层析方法： 3.1薄层层析：薄层层析法是吸附剂在玻璃板上均匀地铺成薄层，把要分析的样品点加到薄层上，然后用适当的溶剂展开，而达到分离、鉴定的目的。其优点是：设