70讲基因工程蛋白质工程幻灯片.pptVIP

1.第一步：获取目的基因 （1）方法：①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③人工合成目的基因 （2）比较基因、基因文库、目的基因的区别 （3）目的基因的扩增呈指数形式扩增（2n） 1.第一步：获取目的基因 （1）方法：①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③人工合成目的基因 （2）比较基因、基因文库、目的基因的区别 （3）目的基因的扩增呈指数形式扩增（2n） 2.第二步：基因表达载体的构建（核心） （1）目的：使目的基因1在受体细胞中稳定存在 并可遗传给下一代；2表达和发挥作用 （2）以质粒为载体，将目的基因与质粒结合的步骤： ①用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个有黏性末端的切口； ②用同种限制酶切断目的基因，产生相同的黏性末端； ③将切下的目的基因片段，插入到质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，使两者结合成重组质粒。 3.第三步：将目的基因导入受体细胞 （1）概念：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。 （2）常用的转化方法（见《导与练》P210） ①导入植物细胞：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 操作过程：P12 ②导入动物细胞受精卵