细胞工程- 总结.docVIP

细胞工程：是指以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。 细胞培养的操作方式有：分批式培养(batch culture)，流加式培养(feeding culture)， 半连续式培养(semi-continuous culture)，连续式培养(continuous culture) ，灌流式培养(perfusion culture) 分批式培养(batch culture)，细胞和培养基一次性加入培养容器中，待细胞增长和产物积累到适当时间，一次性收获细胞、产物和培养基的方法。 流加式培养(feeding culture)在分批培养的过程中，间歇或连续补加一种或多种培养成分的培养方法。一般接种体积为容器总体积的1/2-1/3。可分为单一补料和反复补料两种类型。 半连续式培养(semi-continuous culture)，重复分批式培养或换液培养。在培养过程中，每间隔一段时间从中取出部分培养基和细胞（一般取出1/4-1/2体积），再用新的培养液补足到原有体积，使培养容器内的原有体积不变。 连续式培养(semi-continuous culture)，在培养过程中以一定速度连续不断地加入新鲜培养液，并以同样速度收获含有细胞的培养液，以保持培养体积的恒定。 灌流式培养(perfusion culture)，在培养过程中，不断补充新鲜培养液，同时回收原来的培养液，细胞保留在培养容器中。 植物无性繁殖过程中器官发生方式：不定芽型，器官型，器官发生型，胚状体型，原球茎型。 胚状体：是在组织培养中分化产生的具有芽端和根端，类似合子胚的结构。 细胞分化和形态建成 途径一：外植体→愈伤组织→分生细胞团→不定芽或不定根→完整小植株 途径二：外植体→顶芽或腋芽（无菌扦插）→不定根→完整小植株 途径三：外植体→愈伤组织→胚状体→完整小植株 途径四：茎尖或侧芽→原球茎→毛状假根→完整小植株 培养基的配制 成分：大、微、铁、有、糖、琼、激、pH、其他 配制： 1、配制贮备液。 2、先加约3/4的蒸馏水，再加琼脂和糖，煮至琼脂溶化，注意搅拌，勿使沸出。 3、加贮备液（大、微、铁、有）、激素及其他成份。 4、定容至110%（通常情况下）。 5、充分搅拌，调pH，检查是否遗漏。 6、分装至培养容器中，盖好覆盖物。注意不时搅动，勿使培养基沾污培养容器开口。 7、高压灭菌后取出，冷至室温即可使用。 （若需加入高温高压下易分解的物质？） 人工种子又称合成种子或体细胞种子：指将植物离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中形成的类似种子的颗粒。（人工种子又称合成种子或体细胞种子，是一种含有植物胚状体或芽、营养成分、激素以及其他成分的类似于种子结构的人工胶囊） 人工种子的优势 体积小，结构完整，便于贮存和运输。 繁殖速度快，数量大，效率高。 成本低于试管苗，便于机械化播种。 人工胚乳可根据不同植物的要求配制，可加入适量营养物、激素、有益微生物、抗病抗虫成分，使人工种子优于天然种子。 可作为植物基因工程和遗传工程的载体。 可固定杂种优势，加速良种繁育。 不受季节限制，适于工厂化生产。 人工种子的制备 a 暗处理后的成熟体细胞胚； b 用无菌吸管吸取与包埋剂混合的体细胞胚； c 带体细胞胚的液滴滴入2％CaCl2溶液后形成的白色半透明的包埋丸； d 人工种皮包埋制成的人工种子 胚状体的同步发育? 脱毒方法 物理方法：高温（热疗）法和低温（冷疗）法 化学方法：可抑制病毒在植物体内的复制 生物方法：茎尖培养、微体嫁接、愈伤组织诱导、花药培养和珠心胚培养 茎尖脱毒是控制植物病毒的有效途径 (1)、药物防治病毒病效率低 (2)、抗病毒育种步履艰难 (3)、组培的高效隔离防止了病毒的再侵染 茎尖脱毒技术 母体植株的选择 欲脱毒材料的品种典型性及外植体的健康程度。 取材和灭菌 尽量取刚长出的茎尖或取休眠茎段在人工气候箱中催芽（25~30℃），顶芽腋芽均可。一般选较健壮的芽，用自来水冲洗干净，剥去外层叶片，然后在超净工作台上进行严格的表面灭菌处理，待用。 剥离和接种 利用无菌操作，将灭过菌的芽放在解剖镜下，用解剖针一层一层地仔细剥离叶片，直至露出圆滑生长点。用锋利的解剖刀小心切取0.5mm大小的带1~2个叶原基的茎尖，随即将茎尖接种于培养基上，放入培养室进行培养。 培养 选择合适的培养基是茎尖培养成功与否的关键，多数植物可首先考虑和选择MS培养基，同时要筛选出激素种类及配比，添加适量的其他促进物质和活性物质。接种的茎尖放在培养室内培养，通常温度25℃，光照1000～3000lx，以日光灯