第十章 RN加工与核糖核蛋白复合体.pptVIP

第十章 RNA加工与核糖核蛋白复合体 一、rRNA加工与核糖体 1. RNA的加工类型 成熟的RNA分子很少是转录形成的 大多数新生RNA分子经历多种修饰才成为成熟的产物 RNA加工是对初生转录物进行修饰的总称，常见的加工类型包括： 内切核酸酶和外切酶对核苷酸的切除 向初生RNA转录物或剪切产物的3’端和5’端添加核苷酸 向某些特殊的核苷酸碱基或糖苷进行修饰 2. 原核生物的rRNA加工 在E.coli中，有7种不同的rRNA操纵子分散在基因组中 每一个操纵子都包含5S rRNA、16S rRNA、23S rRNA序列各一个，还包含1~4个 tRNA的编码序列 初生转录物的沉降系数为30S（约6000nt），但存在时间很短 大肠杆菌rRNA转录后加工要经历一系列步骤： 转录物通过内部互补序列间的碱基配对折叠形成一些茎环结构。 茎环结构的形成使得一些蛋白与之结合形成核糖核蛋白复合体（RNP）。 在结合完成以后，一些修饰就开始了。 3. 真核生物rRNA的加工 真核生物中的rRNA也是由一个长的单链前体分子经过特定的修饰和剪切步骤后形成 过程还不是十分清楚 在许多真核生物中，rRNA基因呈串联重复排列，包含100个或更多的转录单位，在核中由RNA聚合酶I转录。 在各种生物体中前体有特定的大小（酵母菌中为7000nt，哺乳动物中为13500nt)，在不同的生物个体之间也有轻微的差异。 前体含18S、5.8S、及28S编码区域的各一拷贝，后两者和起来相当于原核生物中的23S rRNA。 真核生物的5S rRNA由聚合酶III转录散在基因产生出121nt转录物，而且几乎不需要加工。 4. 核糖核蛋白复合体及其研究 在细胞内，RNA分子通常与蛋白复合存在，特定的蛋白与特定的RNA结合。这种RNA与蛋白复合体称为核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP）。 核糖体是最大且最复杂的RNP，在加工过程中由rRNA和特定的核糖体蛋白复合而成。 用于研究RNP的方法有： 分离可将RNP纯化后分解为RNA分子与蛋白，然后在分别鉴定 重装配用来发现组分相应结合在一起的规则，如果这些组分可以被修饰，就可以获得一些关于它们各自功能的线索 电子显微镜直接观察RNP RNP或它们单一组分的抗体来纯化，也可以用来封闭RNP的功能，与电子显微镜联用可以确定特定的组分在整个结构中的大致位置 RNA结合实验显示一种特定蛋白与某一RNA的结合，然后用RNA酶处理RNA-蛋白复合体可以显示出结合蛋白保护了RNA的哪一部分（Raase保护实验） 运用紫外光照射经过和和未经过化学试剂交联的交联实验，可以显示出哪一部分RNA与蛋白分子在复合体中是紧密结合在一起的 中子和X射线最终可以给出RNP完整的三维结构 5. 原核生物的核糖体 大肠杆菌核糖体占干重的25%（总蛋白的10%和总RNA的80%）。 70S核糖体约为2750KD 由一个50S大亚基和一个30S小亚基组成 6. 真核生物的核糖体 80S核糖体由一个60S大亚基和一个40S小亚基 大亚基包含大约45种蛋白、一个5S rRNA分子、一个5.8 S rRNA及一个28S rRNA分子（后两者相当于原核生物23S rRNA) 小亚基包含18S rRNA和大约30种不同蛋白。 每秒总共可以生成约100万个肽键。 二、tRNA的加工、RNA酶P和核酶 1. 原核生物的tRNA加工 成熟的tRNA分子可以从操纵子的前体转录物加工 初级转录本 2 .真核生物的tRNA加工 真核生物酵母菌tRNA前体含有： 一个16nt 5’端前导区 一个14nt 内含子 两个额外的3’端核苷酸 初生的转录物形成一个具有特征茎环的二级结构，内切酶正是识别这种结构并切除5’端前导区和2个额外的3’端核苷酸。 3’端的两个核苷酸被切除后，tRNA核酸转移酶将5’-CCA-3’序列添加到tRNA的3’端，产生出成熟的tRNA3’端。（原核生物成熟tRNA3’端的CCA是基因编码的，但真核生物编码tRNA不属于这种情况） 切除内含子，由内切酶将内含子两端切除后，再将两个半个的tRNA分子连接在一起。 酵母菌前tRNA中的内含子可在脊椎动物细胞内加工，真核生物tRNA加工机制在进化中可能是高度保守的。 3. 核糖核酸酶P RNase P是由一个RNA分子和一个蛋白分子组成的一种内切酶，是一种很简单的RNP。 作用：修剪前tRNA分子产生出成熟的5’端。 在原核和真核生物中均有发现。 真核生物中RNase P位于核内，是一种核内小分子RNP（snRNP)。 在大肠杆菌中，由一个377nt RNA和一个13.7kDa的碱性蛋白组成。 如果向试管中加入前tRNA ，单独的RNA组分就可以行使内切核酸酶功能。 这种RNA是一种具有催化