试验13植物灰分常量元素分析.DOC

实验13 植物灰分常量元素分析 原理 　　植物组织中含有的各种元素，可以利用微量化学分析进行检定。植物所必需的十大元素，除碳、氢、氧、氮在植物组织干燥和灰化过程中丧失外，其余的元素均能在灰分中检出。通常可以利用元素与特殊试剂进行的专一性反应，产生一定形状的结晶或颜色，可在显微镜下作定性鉴定。 仪器药品 　　高温电炉 　　　烘箱 　　显微镜 　　　　台天平 　　白瓷比色板 　　载玻片、盖玻片 　　磷试剂：7g钼酸溶于50ml蒸馏水中，加入50ml 6mol/L HNO3，放置过夜，取上清液备用。 　　硫试剂：10%氯化钡溶液。 　　钾试剂：2g亚硝酸钠，0.9g醋酸铜，1.6g醋酸铅溶解在15ml蒸馏水（含有0.2ml 30%醋酸）中。 　　钙试剂：5%硫酸溶液。 　　镁试剂：5%磷酸氢二钠溶液。 　　铁试剂：5%硫氰化钾溶液或5%亚铁氰化钾溶液。 　　另外分别配制1%磷酸氢二钾、氯化钠、三氯化铁溶液，作为已知元素，用于测定时作对照比较。 操作步骤 　　1．材料灰化 　　取50g菠菜（或其他植物材料），用水洗后再用蒸馏水冲洗一次，吸干水分，放在搪瓷盘中，于105℃烘箱中烘干。然后于高温电炉中进行灰化，直至材料成灰白色无炭色为止。 　　2．将灰分0.5g溶解于2ml 10%盐酸中，过滤后的灰分溶液用作以下的检定。 　　3．元素的检出 　　磷：放一滴1%磷酸氢二钾溶液于载玻片上，在煤气灯上用小火烘干，于残迹上加1滴磷试剂，盖好盖玻片，用低倍显微镜观察结晶的形状和颜色（注意本试验中所用试剂具强烈的腐蚀性，切勿接触显微镜特别是镜头，必须盖好盖玻片再进行观察！）。然后用灰分溶液作同样试验，观察其结果。 　　硫：与上述步骤相同，先用1%硫酸镁和硫试剂作用，在显微镜下观察结晶的形状和颜色。然后用灰分溶液作同样试验，观察其结果。 　　钾：与上述步骤相同，先用1%磷酸氢二钾和钾试剂作用，在显微镜下观察结晶形状和颜色，然后用灰分溶液作同样试验，观察其结果。 　　钙：与上述步骤相同，先用1%氯化钙和钙试剂作用，在显微镜下观察结晶形状和颜色。然后用灰分溶液作同样试验，观察其结果。 　　镁：与上述步骤相同，先用1%硫酸镁和镁试剂作用，在显微镜下观察结晶形状和颜色。然后用灰分溶液作同样试验，观察其结果。 　　铁：取1%三氯化铁溶液滴于白瓷比色板上，加1滴铁试剂观察是否有颜色出现（试剂为硫氰化钾则产生红色，如为亚铁氰化钾则产生蓝色）。然后用灰分溶液作同样试验，观察其结果。 实验17 植株中总铁量的测定 Ⅰ．硫氰化物法 原理 　　高铁与硫氰化物反应生成红色硫氰化铁 　　Fe3++3CNS－→Fe(CNS)3 　　其颜色深度与铁含量成正相关，可用比色法进行测定。加适量丙酮可使反应产物都以分子形式存在，从而着增强颜色深度，提高测定灵敏度。若在高锰酸钾作用下，使亚铁氧化为高铁，则可以测定样品中总铁含量（反应液在光亮处迅速褪色，因而必须及时测定或置于暗处待测）。 仪器药品 　　分光光度计 　　　　 过滤漏斗与过滤瓶 　　容量瓶 　　　　　　 移液管 　　试管　　　　　　　　烧杯 　　浓盐酸、　　　　　　6mol/L盐酸和0.1mol/L盐酸 　　20%硫氰化钾(AR) 　　丙酮(AR) 　　0.1mol/LKMnO4：称取KMnO43.161g加蒸馏水溶解后稀释成1000ml。 　　标准铁溶液（任备其一）： 　　1．精确称取电解铁0.1g溶于10ml无铁浓盐酸中，等完全溶解后，加入饱和氯酸钾5ml，定容到1000ml。每毫升含铁0.1mg。 　　2．精确称取硫酸高铁铵[NH4Fe(SO4)2·12H2O]0.8634g，溶于20ml 1mol/L H2SO4中，用蒸馏水定容至1000ml。每毫升含铁0.1mg。 操作步骤 　　1．灰分溶液的制备 　　将植物组织烘干灰化，取干灰0.5g于小烧杯中，加入6mol/L盐酸5ml使灰分溶解，再加入0.1mol/L盐酸20ml搅匀，用过滤漏斗抽滤，再用适量0.1mol/L盐酸洗涤烧杯和滤纸，一并滤入，最后用水定容到250ml。 　　2．测定 　　吸取灰分液1ml置于试管中，依次加入蒸馏水1.5ml，高锰酸钾液1滴，使产生持续粉红色，加6mol/L盐酸1ml，充分摇匀，加KCNS液1.5ml，摇匀，加5ml丙酮，边加边摇匀，置于暗处待测。以1ml蒸馏水代替样品做同样处理作为空白。用分光光度计于波长500nm下测定，并读取吸光度A。从标准曲线上查出每毫升含铁量，按下面化式计算样品中总铁含量： 　　Fe(μg/g干灰)=C·V 　　其中C为标准曲线上查出之每亳升灰分溶液含铁微克数；V为1g灰分2备所得的灰分溶液总体积(ml)。 　　3．标准曲线的绘制 　　将标准铁溶液制成含铁浓度为1、4、8、12、16、20μg/ml系列的标准溶液，