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实验八 平板菌落计数法 一、目的要求 学习平板菌落计数的基本原理和方法。 二、基本原理 平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。 三、器材 酵母菌悬液， 牛肉膏蛋白胨培养基， 1mL无菌吸管 无菌平皿 盛有9 mL无菌水的试管 四、操作步骤 1．编号： 取无菌平皿 8套，在皿底分别标记10-5、10-6 、10-7、10 -8各2套。（不得开盖，） 取1只装有99mL无菌水的三角瓶1只，标明10-2。 另取6支盛有9mL无菌水的试管，排列于试管架上，依次标记10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8。 2．稀释 用1ml无菌吸管精确地吸取1mL原菌悬液放入10-2的三角瓶中，注意吸管尖端不要碰到液面，以免吹出时，容器内液体外溢。然后仍用此吸管将瓶内悬液来回吸吹三次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。另取一支吸管自10-2三角瓶中吸1mL放入10-3试管中，吸吹三次，……其余依次类推。整个稀释过程如图。 3．取样 用4支1mL无菌吸管分别精确地吸取10-5、10-6、10-7、10-8的稀释菌液1ml，对号放入编好号的无菌培养皿中。 4．倒平板 于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入溶化后冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基约10—15mL，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，倒置于37℃温室中培养。 5．计数 培养24小时后，取出培养皿，算出同一稀释度两个平皿上的菌落平均数，并按下列公式进行计算： 每毫升中总活菌数=同一稀释度两次重复的菌落平均数×稀释倍数 四 实验结果 填表 操作录像 灭菌:轮流值守 摆放斜面试管: 土壤及细菌原液稀释:土壤稀释分离 倒平板:每人3个,分离用2个,计数用1个. 接种:平板菌落计数每人一只平板.土壤稀释分离: 每人划2个平板,放线菌和霉菌各一个. 培养:细菌37℃;放线菌,霉菌28℃(分开放置) 观察,分离和计数:平板菌落计数48小时后;放线菌和霉菌接种3天后开始 形态观察:一周后. * * 一般选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释度计算每毫升的菌数最为合适。 同一稀释度的两个重复的菌数不能相差很悬殊。 不同稀释度计算出的每毫升菌液中总活菌数也不能相差悬殊，如相差较大，表示试验不精确。 实验安排 培养基配制:3种,分实验台配制（每组400mL） 第一台:牛肉膏蛋白胨固体培养基: 平板菌落计数法用. 第二台:高氏一号固体培养基: 分离放线菌 第三台:土豆蔗糖培养基: 分离霉菌 分装:三角瓶(装99mL水(加玻璃珠)，每台1只) 斜面试管(装土豆蔗糖培养基,每人2只) 稀释用试管(事先装无菌水4.5mL,每组3只) 相关材料.
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