实验七.人类巴氏小体的观察.ppt.pptVIP

实验七、人类细胞巴氏小体(Barr body)的观察 一、 实验目的： 学习和掌握人体Barr小体的制片技术；观察Barr小体；了解Barr小体数目与人类性别畸形的关系；了解异固缩现象。 二、 实验原理： 巴氏小体是由于女性两个X染色体中的一个失活形成的。 Lyon的剂量补偿学说认为：女性虽然有两个X染色体，但所表达的绝大部分遗传物质，与只有1个X染色体的男性是一样多的。 1949年，Barr等在雌猫的神经元细胞中发现一种浓缩小体，称Barr小体。而雄猫无。 1955年，Barr在女性的口腔细胞中发现Barr小体。 1959年，人们把性染色体异常造成的畸形与巴氏小体的研究联系起来。 1971年， Barr小体被称为X染色质。 食道癌病人巴氏小体出现率低于10%； 正常人细胞出现率为20-45% 女性的X染色体中只有1个保持活性，而另一个晚复制，没有活性。该失活的X染色体在形态上呈异染色质状态，即DNA螺旋压的很紧，染色深而致密。  XY XX X染色质的失活只是部分失活，仍然有部分基因具有转录活性，目前已知的大约有十几个基因有活性。 Barr小体的数目 = n-1 (n为X染色体数目) 性染色体类型 巴氏小体数目 正常男性 XY 0 正常女性 XX 1 Turner’s syndrome XO 0 Klinefelter’s syndrome XXY 1 超雌综合症 XXX 2 雌性染色体类型 雄性染色体类型 果蝇 XX XY 线虫 XX XO 雌性染色体类型 雄性染色体类型 果蝇 XX XY 线虫 XX XO 在果蝇中，雌性中的两条X染色体都有活性，而在雄性XY或XO中唯一的一条X染色体超活性; 线虫的剂量补偿机制是在XX个体为雌雄同体，两条X染色的连锁基因的转录活性同时减弱，使之处于低活性状态，即每条X染色体基因的表达水平是单条X染色体（雄性中）的表达水平的一半，以便实现与雄性（XO）个体的，只具一条X染色体上连锁基因活性的剂量补偿。 巴氏小体鉴别特征 一般出现在细胞分裂周期的间期； 直径为1μm左右； 一般位于核膜内侧边缘； 形状多样，多为半圆形，三角形等形状； 材料不同，观察结果可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核膜较远或接近核中央部位）。 3. 观察 在女性间期细胞核内侧靠近核膜处有约1微米大小的反光极强的颗粒状亮点，即为巴氏小体。材料不同，观察结果可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核膜较远或接近核中央部位）。 三、 实验材料： 男、女性口腔颊部粘膜上皮细胞、头发根部的毛囊细胞 粘膜上皮细胞个体较大，容易观察，但易污染细菌等杂质； 头发毛囊细胞个体稍小，观察稍困难，优点是不受细菌污染。 四、 实验器具及用品： 实验器具：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌牙签等。 实验药品和试剂： 1、1N或5N盐酸，或浓盐酸和95％乙醇 1：1的混合液。 2、改良苯酚品红染色液。 五、 实验步骤 ： （一）口腔粘膜细胞Barr氏小体显示方法： 1、取材与固定：实验前用可食用水漱口，然后以无菌牙签刮取口腔颊部粘膜(第一次的刮取物弃去)，将刮取物均匀涂于载玻片上，放在空气中干燥5-10min。滴加1N盐酸水解3-5min。水洗3次。 2、染色与观察：用改良苯酚品红染液染色1-2分钟，倾斜载玻片，倒掉染液。用吸水纸轻轻擦拭干载玻片上的染液。加盖玻片后放于显微镜下观察。 也可以考虑用Giemsa染色：用Gimsa染液染色8-10分钟，勿干燥，用水冲洗后，晾干，镜检。 五、 实验步骤 ： （二）发根毛囊细胞Barr氏小体显示方法： 1、取材：取带有发根的头发，围绕发根部的1圈长2-3mm的白色物体，即是毛囊细胞团，将其放置于载片上。在毛囊细胞处滴加一滴浓盐酸和95％乙醇1：1的混合液。约10min以后，可使毛囊细胞得到充分软化。以清水冲洗2-3遍，将酸解液冲洗干净。拿起上述发根的梢部，将其上毛囊细胞轻轻蹭于另一干净载片上即可达到转移的目的。 2、染色：可滴加1滴染液于待测细胞上，注意染液不可过多，以免细胞流失。约2-3min后，加盖玻片即可进行观察。 六、注意事项： 1. 在制备口腔粘膜细胞时，一定刮取细胞膜、核膜完整的、细胞核未解体的口腔粘膜细胞。 2. 取清洁的毛囊；一根发根的毛囊细胞可以转移到1-2张载片上，以达到充分利用实验材料的目的。 酸洗后，要将盐酸清洗干净。 染色时间不要太长，否则核质着色深，X染色质不易区分。 5. 低倍镜下检出典型的可数细胞，其标准是： -- 细胞周围无细菌污染； -