第二章可见紫外分光光度法.pptVIP

第二章 紫外-可见分光光度分析法 一、光的基本性质 二、能级与跃迁 分子中的电子总是处在某一运动状态中，每一种状态都具有一定的能量，属于一定能级。当它得到时，电子由于受到光、热、电等的激发，得到适当的能量，从一个能级转移到另一个能级，称为跃迁。 分子能级跃迁 分子能级跃迁较原子 能级跃迁更为复杂。 分子内部除了电子运 动状态外，还有核间 的相对运动，即核的 振动和分子围绕着重 心的转动。 有色溶液的颜色为什么会有深浅？ 1、同一种物质对不同波长的光吸收能力是否存在差异？ 2、不同的物质对相同波长的光的吸收是否存在差异？ 分子只会选择吸收满足能级差能量的波长 各种分子内部结构不同，分子的能级也千差万别，各种能级之间的间隔也互不相同，这样就决定了它们对不同波长的光线的选择性吸收。 吸收曲线 改变通过某一吸收物质的入射光的波长，并记录某物质在每一波长处的吸光度（A），然后以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标作图，这样的谱图称为该物质的吸收光谱或吸收曲线。 叶绿素的结构和吸收光谱 吸收曲线的讨论 三、比色法 通过显色反应，比较待测溶液与标准溶液颜色的深浅来确定待测物质的含量为比色法。 目视比色法 光电比色法 分子吸收分光光度法（分光光度分析法） 分光光度分析法是以物质对光的选择性吸收为基础的分析方法。 根据物质所吸收光的波长范围不同 几乎所有的无机离子和许多有机化合物可以用分光光度法进行测定。如微生物培养基中的氮、磷以及各种微量元素的测定。 通常，待测物质的含量1～10－5％时，能够用分光光度法准确测定。所以它主要用于测定微量组分。 分光光度分析法： 基于发射的电磁辐射与待测物质相互作用后所产生的辐射信号与物质组成及结构关系所建立起来的分析方法。 基本特点： 第二节 紫外可见分光光度计 一、基本组成 general process 2.单色器（波长选择器） 光栅和棱镜分光原理 3.样品室 二、分光光度计的类型 双波长光度计光路示意图 四、光的吸收定律 朗伯定律：A=K2*L 比尔定律：A=K3*C 透过光的强度It；与入射光的强度Io比之比称为透光度或透光率，用T表示。 T＝ It / Io 透光度 2.摩尔吸光系数k的讨论 摩尔吸光系数的讨论 3.偏离朗伯—比耳定律的原因 （1）物理性因素 非单色光作为入射光引起的偏离 讨论: 讨论: A总 =A1 + lg2 - lg(1＋10－?kLc )  (2) 化学性因素 4、吸光度的加和性 当溶液中含有多种对光产生吸收的物质，且各组分间不存在相互作用时，则该溶液对光的总吸光度等于每一成分的吸光度之和。 使多组分定量测定成为可能 紫外-可见分光光度法中条件的选择 一、显色反应的选择 3.氧化还原显色反应 4.显色剂 二、显色反应条件的选择 三、共存离子的消除 四、测定条件的选择 2.选择合适的参比溶液 参比溶液的选择一般遵循以下原则： 3.控制适宜的吸光度（读数范围） 最佳读数范围与最佳值 定量分析 一、对单一物质的分析 比较法 标准曲线法 比较法 在相同条件下配制样品溶液和与待测组分浓度相近的标准溶液，在相同实验条件下测得吸光值Ax和As，然后进行比较。 Cx=Cs*(Ax/As) 二、两个以上组分的定量分析 1、混合物的吸收光谱不重叠或部分重叠 选择适当的波长， 按单一组分的方法测定 2、吸收曲线重叠 根据吸光度的加和性来处理。 在两个最大波长处测得吸光值A1和A2 利用双波长分光光度法进行定量分析 波长的选择 四、分子吸收光谱与分子结构 ?⑴　σ→σ＊跃迁 ? ⑶ π→π＊跃迁 生色团与助色团 红移和蓝移 有机化合物的吸收谱带常常因引入取代基或改变溶剂使最大吸收波长λmax和吸收强度发生变化: λmax向长波方向移动称为红移，向短波方向移动称为蓝移 (或紫移)。吸收强度即摩尔吸光系数k增大或减小的现象分别称为增色效应或减色效应，如图所示。 吸光度读数在 范围内，测量较准确。 A．0～1 B．0.2～0.7 C．0～0.8 0.15～1.5 分光光度计产生单色光的元件是： A．光栅＋狭缝 B．光栅 C．狭缝 D．棱镜 分光光度计测量吸光度的元件是： A．棱镜 B．光电管 C．钨灯 D．比色皿 摩尔吸光系数与吸光系数的转换关系： A．a＝M·k B．k＝M·a C．a＝k ／ M D．A＝M·/k 一般分析仪器应预热 A．5分钟 B．10～20分钟 C．1小时 D．不需预热 .常规分析一般平行测定次数: A．6次 B．3次 C．1次 D．20次 分光光度法测定实验中，绘制工作曲线标准系列至少要几个