第六章高液相色谱法.pptVIP

第六章 高效液相色谱法 一、HPLC与经典LC区别 二、HPLC与GC差别 三、HPLC的特点和应用 第一节 HPLC的主要类型及选择 一、液-固吸附色谱 二、液-液分配色谱 三、键合相色谱 （一）反相键合相色谱 （二）正相键合相色谱  四、凝胶色谱（分子排阻色谱法） 五、离子交换色谱 六、分离类型的选择 1．根据相对分子质量选择 相对分子质量十分低的样品，其挥发性好，适用于气相色谱。 标准液相色谱类型（液一固、液一液、离子交换色谱）最适合的相对分子质量范围是20O～2000。 对于相对分子质量大于2000的样品，则用尺寸排阻法为最佳。 2．根据溶解度选择 弄清样品在水、异辛烷、苯、四氯化碳、异丙醇中的溶解度是很有用的。 如果样品可溶于水并属于能离解物质，以采用离子交换色谱为佳； 如样品可溶于烃类（如苯或异辛烷），则可采用液一固吸附色谱； 如样品溶解于四氯化碳，则多采用常规的分配和吸附色谱分离； 如样品既溶于水又溶于异丙醇时，常用水和异丙醇的混合液作液一液分配色谱的流动相，以憎水性化合物作固定相。  表 液相色谱分离类型选择参考表 溶于水——排阻色谱，水为流动相 相对分子质量 ＞2000 不溶于水——排阻色谱，非水流动相 同系物——分配色谱 不溶于水 异构体——吸附色谱 样品 分子大小差异——排阻色谱 反相液一液色谱 相对分子质量 溶于水，不离解 ＜2000 排阻色谱，水为流动相 碱——阳离子交换色谱 溶于水，可离解 酸——阴离子交换色谱 溶于水， 离子与非离子—反相离子对色谱 第二节 高效液相色谱仪（high performance liquid chromatograph，HPLC） 一、仪器工作流程 HPLC的仪器配置及流程 二、主要部件 （一）高压输液系统 （二） 进样系统 （三）色谱柱系统 （四）检测器系统 光电二极管阵列检测器 （五）色谱工作站 三、高效液相色谱仪的使用 第三节 高效液相色谱的基本理论和实验技术 一、速率理论 二、实验技术 三、HPLC法中分离条件的选择 四、定性与定量方法 五、 HPLC的应用 输液泵操作注意事项： 防止固体微粒进入泵体 流动相不应含有腐蚀性物质 防止溶剂瓶内的流动相被用完 不超过规定的最高压力 流动相一般应该先脱气 3、过滤器 （1）作用：除杂质。 （2）类型： 溶剂过滤器、管道过滤器。 4、梯度淋洗装置 （1）作用：缩短时间，使各组分完全分离。 （2）类型： ①高压梯度：利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 ②低压梯度：一台高压泵, 通过比例调节阀，将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置。 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 1、紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 适于：吸收紫外光的物质。 特点：灵敏度高； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm×10mm，容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可